血液检测 Epstein-Barr 病毒抗体和 PCR：如何通过、规范
最近審查：04.07.2025
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我们通常理解的疱疹是指面部唇部出现难看、疼痛且水疱性的皮疹，随后会结成褐色痂皮。然而，这只是疱疹病毒的一种表现形式，人类疱疹病毒有8种类型。我们通常所说的疱疹是1型疱疹病毒，又称单纯疱疹病毒。2型疱疹病毒可引起生殖器疱疹，3型疱疹病毒可引起“水痘”和带状疱疹，4型疱疹病毒可引起传染性单核细胞增多症以及其他几种相当危险的疾病，等等。这个列表还可以继续延伸，但我们将重点介绍4型疱疹病毒，也称为爱泼斯坦-巴尔病毒。让我们来了解一下4型疱疹病毒是什么，它为什么危险，何时以及为何进行爱泼斯坦-巴尔病毒检测，以及实验室检测结果意味着什么。
什么是 4 型疱疹病毒？
疱疹病毒4型是疱疹病毒感染的一种，53年前由英国病毒学家迈克尔·爱泼斯坦（Michael Epstein）描述。在该项目研究中，他的研究生伊冯娜·巴尔（Yvonne Barr）协助了这位教授。该病毒的名字也源于这些人。然而，在发现该病毒15年后，其学名被改为人类疱疹病毒4型（Human Herpesvirus 4），一年前，该病毒被称为人类γ病毒4型（Human Gammavirus 4）。
那么，爱泼斯坦-巴尔病毒究竟是什么呢？与其他病毒一样，疱疹病毒4型的病毒体（病毒颗粒）由遗传物质（此处为双链DNA）和周围的蛋白质外壳（衣壳）组成。此外，病毒还被一层膜包裹，这有助于其轻松进入宿主细胞。
任何病毒都是非细胞形式，具有传染性，无法在生物体细胞外发育和繁殖。4型疱疹病毒最喜爱的栖息地被认为是鼻咽上皮细胞。它们也不排斥白细胞，而是优先选择其中一种名为B淋巴细胞的细胞。B细胞积极参与提供人体的免疫防御。当接触抗原（在我们这里指的是4型疱疹病毒，或者更确切地说是其抗原）时，B淋巴细胞会产生抗体（免疫球蛋白）。通过对患者血液进行爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）检测，可以检测到这些抗体。
4 型疱疹病毒有 4 种抗原，按严格定义的顺序出现：
- EA 是疾病初期出现的早期抗原，此时病毒颗粒处于合成阶段（原发性急性感染或免疫力降低时潜伏病毒的重新激活），
- VCA是包含在蛋白质外壳中的衣壳抗原，也属于早期，因为临床上这种疾病在这个时期甚至可能没有表现出来，
- MA – 膜抗原，在病毒体已经形成时出现，
- EBNA——核（多肽或核）抗原是晚期抗原之一，其抗体甚至在疾病发生数月后仍可检测到，并可终生存在于血液中。
疱疹病毒4型非常隐匿。由于病毒在生物体外不活跃，因此只有通过感染源才能传播。感染者并不一定表现出所有症状；感染可能潜伏，伪装成普通的疲劳。例如，慢性疲劳综合征通常与爱泼斯坦-巴尔病毒有关。
单个病毒粒子存在于血液、唾液、精液、阴道分泌物以及各种器官的组织中。病毒粒子会随唾液和血液进入我们周围的物体，在那里它们会保持非活性状态，直到以某种方式进入人体。绝大多数情况下，感染是通过空气飞沫或接触（例如接吻）发生的。但病毒也可能通过宫内传播，从母亲传播给胎儿，输血（如果捐献者的血液中含有病毒粒子）以及性接触传播。
病毒进入人体并渗透到细胞结构后，可能需要5到50天才能显现。但大多数情况下，病毒可能不会显现，而是以潜伏形式进行。
是的，根据研究，大约90%的成年人一生中至少感染过一次EBV相关的疱疹病毒。大多数人甚至都不知道，因为他们的身体能够抵抗病毒的侵袭。但情况并非总是如此。
爱泼斯坦-巴尔病毒如何表现？
大多数情况下，医生在实践中必须处理以下类型的 4 型疱疹病毒感染：
- 慢性形式（在疾病的急性期之后发生，具有一些一般的健康不良症状），
- 潜伏或隐藏形式（没有症状，但病毒仍然活跃并被释放到环境中），
- 缓慢型（不太常见，症状在很长一段时间内逐一出现，最终导致患者死亡）。
人们首次感染爱泼斯坦-巴尔病毒主要发生在儿童和青少年时期。发病高峰期在14至18岁之间。
原发性病毒感染有 3 种不同形式：
- 无症状（无临床表现），
- 呼吸道（呼吸道感染症状：发烧、流鼻涕、全身无力等），
- 传染性单核细胞增多症，主要症状有三：高烧、咽喉痛、扁桃体结黄色痂、肝脏、脾脏等器官肿大；白细胞增多、淋巴结肿大。
有几种方法可以帮助摆脱疾病的急性期：
- 完全康复，
- 疾病症状消失，但病毒仍留在体内并发展，尽管它不再导致细胞发生明显变化（携带者状态），
- 没有疾病症状，病毒不会离开身体，但也几乎没有活性（潜伏形式），
- 病毒从潜伏状态重新激活，
- 慢性感染过程（疾病复发，慢性活动性形式，全身器官和身体系统受损）。
病毒在体内长期停留的后果可能是：
- 慢性传染性单核细胞增多症。
- 噬血细胞综合征：持续发热，血液成分减少（凝血性增强），肝脾肿大，粘膜出血，黄疸（肝功能障碍引起），淋巴结肿大，神经系统症状。
- 潜伏期伴随继发性免疫缺陷的发展：长期高热，全身无力，淋巴结肿大和酸痛，肌肉和关节疼痛，频繁感染疾病。
- 红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的发展。
- 慢性疲劳综合症的表现是整体健康和表现的恶化。
- 全身性慢性感染，会损害中枢神经系统、心肌、肾脏、肝脏和肺。
- 肿瘤疾病（淋巴细胞白血病和淋巴瘤）的发展，其中淋巴系统细胞数量出现病理性增多。4型疱疹病毒不会破坏携带细胞，而是迫使其主动增殖，从而导致淋巴组织中出现肿瘤。
由此可见，爱泼斯坦-巴尔病毒并非乍看起来那么无害，因此不应掉以轻心。此外，4型疱疹病毒的特点是病毒携带和潜伏期频繁，更不用说各种形式的慢性感染，即使患者本人没有察觉，也依然是传染源。
在这种情况下，只能使用针对爱泼斯坦-巴尔病毒的特殊分析来确定体内是否存在传染源，而这种病毒的生物材料通常是血液。
程序的適應症 Epstein-Barr 病毒检测。
由于疱疹病毒4型感染有时不易检测，因此医生通常不会怀疑。但医生可以通过以下某些体征怀疑体内存在病毒：
- 免疫系统严重衰弱（HIV感染者和艾滋病患者、器官移植或化疗后患者有风险），
- 下巴和头部枕骨区域淋巴结肿大并伴有疼痛，尤其是在输血或接受捐献者器官移植后出现。
- 急性呼吸道病毒感染（ARVI），发生在极高温度（38-40度）的背景下，
- 出现传染性单核细胞增多症的症状，这种症状最常发生在爱泼斯坦-巴尔病毒的影响下。
即使一个人没有上述症状，专家也可能会根据一些常规检查（一般血液分析和生物化学）以及免疫状态研究的结果产生怀疑。
EB病毒全血细胞计数可能显示：
- 淋巴细胞数量增加，
- 血红蛋白低，表明红细胞水平下降，
- 由于血小板数量增加，血液凝结增加，
- 病毒细胞（结构类似于单核细胞的非典型淋巴细胞）的出现。
生化血液测试提供有关内脏器官状态的信息，将显示肝脏和脾脏功能的变化。
EBV 免疫测定可能显示特定淋巴细胞数量的变化、不同类别免疫球蛋白数量的差异（免疫球蛋白血症异常）以及免疫球蛋白 G 的缺乏，这表明免疫系统较弱，无法控制病毒的攻击。
这种非特异性分析结果可能会引起医生的警惕，但目前还无法确切地说明他们正在应对的是什么。一切都停留在假设和初步诊断阶段。在大多数情况下，医生怀疑是潜伏型传染性单核细胞增多症，尽管其他病毒性疾病（流感、肝炎等）也可能以相同的方式表现出来。
由于四型肝炎的发病率很高，且存在母婴传播的可能性，因此在计划怀孕时进行爱泼斯坦-巴尔病毒检测也十分有用。如果母亲之前感染过这种病毒，她的身体已经产生了抗体。由于形成了强大的免疫力，通常可以避免再次感染；即使再次感染，也不会像第一次感染病毒那样造成严重后果。免疫力会终生抑制病毒的活性，尽管病毒本身会像任何疱疹病毒一样在体内残留。
如果孕妇在怀孕期间感染疱疹病毒，可能会导致流产和早产，或者病毒会对婴儿的宫内发育产生负面影响。
如果怀疑患有伯克特淋巴瘤或诊断HIV感染者的肿瘤进展，肿瘤科医生可能会安排EBV检测。治疗师可以使用该检测来诊断疱疹感染（进行鉴别诊断以确定病毒类型）。有时，该检测也用于评估治疗效果。
製備
根据研究类型，生物材料可以是血液、唾液、尿液、痰液、羊水样本、宫颈或尿道刮取物、脑脊液（CSF）。医生通常会选择血液检测，因为它被认为是最有用的检测方法。
显然，某些因素可能会对生物材料的质量和数量产生负面影响，因此值得在前一天遵循某些规则：
- 任何检查（尤其是血液检查）建议在早晨空腹进行。最后一餐应不晚于采血前12小时，因此晚餐最好喝水。
- 分析爱泼斯坦-巴尔病毒最可接受的材料被认为是静脉血，并且如果一个人刚到达实验室，在捐献静脉血之前，总是建议休息 15 分钟，
- 为了确保采血过程顺利进行且检测结果可靠，建议在采血前 12 小时内不要进行剧烈体力劳动或运动、饮酒或吸烟。
- 您正在服用的药物也可能会影响检测结果。您应该在检测前至少2天停药。如果无法停药，您必须告知实验室护士您正在服用的药物。
- 在怀孕期间，在进行 EBV 检测之前，会进行弓形虫病检测以排除假阳性反应。
- 如果对 5 岁以下儿童进行爱泼斯坦-巴尔病毒血液检测，则在检测前半小时应让孩子少量饮用大量白开水。
如果要采用其他生物材料进行分析，则需要提前与医生明确根据所用材料进行分析准备的所有细节。
技術 Epstein-Barr 病毒检测。
医生认为，在诊断4型疱疹和传染性单核细胞增多症方面，一些特定的检测方法至关重要，这些检测方法有助于识别病毒DNA或患者生物材料中特有的抗体。用于检测人体内爱泼斯坦-巴尔病毒的主要实验室检测类型包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链式反应（PCR）诊断。让我们仔细探讨这两种方法的本质及其实施特点。
EBV酶联免疫吸附试验
ELISA 检测法是对患者静脉血进行 Epstein-Barr 病毒抗体检测（分析）。诊断结果显示，EBV 患者血液中可检测到针对病毒 3 种抗原（早期抗原、衣壳抗原或核抗原）之一的 IgG 或 IgM 型（共 5 种类型）免疫球蛋白。
分析在免疫实验室进行，从患者静脉抽取约10毫升血液。然后将生物材料置于室温下静置一刻钟，在此期间血液凝固。将血凝块与液体部分小心分离。将液体离心，即可获得纯血清。该血清将用于进一步检测。
该方法的构思基于以下数据：人体会对从外部侵入体内的各种病毒和细菌产生特异性抗体。人体会将它们识别为外来者，并借助能够牢固粘附于抗原的独特抗体将其消灭。
ELISA分析的本质就是基于这种反应。带有标签的抗体与抗原结合。将一种物质添加到标签上，当这种物质与一种特殊的酶发生反应时，样品的颜色会发生变化。这种“链”越多，生物材料的颜色就越深。
酶联免疫测定法可采用三种方法进行：
- 直接ELISA法。将检测液加入孔中，静置约半小时，使抗原附着在孔壁上。将标记抗体的液体加入已吸附的抗原中。经过所需时间（半小时至5小时），当抗体被检测到并与抗原结合时，将液体吸干，仔细清洗孔板，并加入酶。通过显色法测定单位血液中的病毒浓度。
- 间接ELISA。在该方法中，待测血清和标记抗体被添加到吸附在孔表面的抗原中。结果得到两种类型的标记物，其中一些被标记。结果取决于待测样品中抗原的浓度。未标记抗体越多，被酶标记的化合物就越少。
接下来，将一种特殊试剂添加到清洗后的组合物中，用于测定抗原抗体复合物的酶活性。
- “夹心法”。与间接法不同，该方法最初吸附在载体表面的不是抗原，而是抗体。将含有待研究抗原的溶液加入载体上。清洗载体后，加入酶标记的抗体。再次去除多余的抗体，并使用过氧化氢获得有色物质，然后使用光谱法进行研究。
这种分析不仅可以识别特异性抗体并确定抗原浓度，还可以明确疾病的阶段。事实上，EB病毒的不同抗原在疱疹感染的不同阶段出现，这意味着针对这些抗原的抗体是在疾病的某个阶段产生的。
因此，针对早期抗原的IgG抗体（IgG EA）会在感染后1-2周（疾病处于急性期或病毒再激活期）出现在血液中。此类免疫球蛋白会在3-6个月后消失。在慢性病毒感染过程中，此类抗体尤其多，而在非典型病毒感染中，则完全缺失。
针对衣壳抗原的 IgG 抗体 (IgG VCA) 也早于疾病最初 4 周出现，但其数量最多则出现在感染的第二个月。在急性期，大多数患者都会出现这种抗体，但儿童可能不会出现。在疾病的慢性病程中，尤其是在病毒复发期间，IgG VCA 的含量尤其高。这些抗体会像病毒本身一样永久存在于人体血液中，这表明人体已形成了对传染源的免疫力。
衣壳抗原 IgM 抗体 (IgM VCA) 甚至可能在疾病初期症状出现之前就已出现。其浓度（滴度）在疾病的前 6 周尤其高。此类抗体是急性感染和慢性感染复发的特征。IgM VCA 抗体会在 1-6 个月后消失。
抗核基因IgG抗体（IgG EBNA）可能提示患者此前曾直接感染过疱疹病毒。在疾病急性期，这种抗体极少被检测到，通常出现在恢复期（第3-10个月）。感染数年后，血液中仍可检测到这种抗体。
检测单一抗原并不能全面了解疾病，因此应同时检测不同的抗体。例如，如果仅检测出 IgM VCA，而未检测到 IgG EBNA，则为原发性感染。
遗憾的是，酶联免疫吸附试验通常不足以检测原发性疱疹感染或先天性病变。在后一种情况下，可能根本检测不到抗体。为了确认原发性疾病，需要对血液或其他生物样本进行爱泼斯坦-巴尔病毒的分子检测。
EB病毒PRC分析
该分析必须在急性原发感染阶段进行，否则其结果将不正确。
PCR（多维链式反应）方法的本质是，每种传染源的DNA分子中都包含一组独特的基因。病原体的DNA在用于研究的生物材料中含量极少（病毒本身的尺寸极小），因此很难评估其情况。但如果进行特定的反应，遗传物质的数量将显著增加，从而有可能对病原体进行命名。
使用一次性仪器采集分子研究材料，并将其放入一个特殊的装置中进行分析。该装置是一个带有特殊程序的恒温器——热循环仪或放大器。该装置运行完整的PRC循环数十次（约2-3分钟），分为三个阶段：
- 变性（在95度的温度下，DNA链分离）。
- 退火（在 75 度的温度下，将专门为 EBV 制备的“引物”引入到所研究的材料中，这些引物附着在病毒的 DNA 上）。
- 遗传物质的延伸或繁殖（在 72 度的温度下将一种特殊的酶添加到种子中，从而重新创建新的 DNA 链，从而使遗传物质的数量加倍）。
如果多维反应的完整循环运行50次，物质的数量将增加100倍。这意味着识别病原体将变得更加容易。
儿童爱泼斯坦-巴尔病毒检测
众所周知，爱泼斯坦-巴尔病毒可引发多种疾病。一旦进入人体，它就会成为人体的永久寄生虫，只有在免疫系统的协同作用下，它才能阻止病毒主动寄生在细胞内。
全球近95%的成年人体内都携带EB病毒，其中大多数人在幼儿时期就接触到了这种病毒。有些人从母亲那里遗传了病毒，而另一些人则从父母或亲戚那里感染了病毒，这些父母或亲戚会冲到孩子身边亲吻，或者在幼儿园或学校通过空气中的飞沫传播病毒（这些地方的传染病通常具有“普遍性”）。
小孩子通常喜欢把所有东西都放进嘴里，而唾液中病毒的数量最多。如果在幼儿园里，当老师们忙着自己的事情时，几个孩子会舔同一个玩具，那么病毒在大群孩子中如此活跃地传播也就不足为奇了。
EBV 很容易被称为儿童和青少年疾病，因为到了青春期，一半的儿童体内已经存在这种病毒（到了 30 岁时，大约 90% 的成年人体内已经存在这种病毒）。不同年龄段的儿童患病方式各有不同。一岁以内，如果孩子不主动与人交流，患病的概率很小。一岁以上的孩子，即使还没上幼儿园，也会变得更加善于社交，在街上和同龄人玩耍，和妈妈一起积极购物等等，感染病毒的概率就会大大增加。
但这并不是把孩子锁在家里的理由。在1-3岁的时候，这种疾病绝大多数情况下没有任何症状，除了可能出现轻微的体温升高和轻微的流鼻涕，类似感冒。事实证明，孩子越早接触病毒，就越容易感染。
如果孩子生病时血液中没有出现IgG VCA抗体，那就不好了，这可能表明尚未形成对病毒的免疫力，一旦免疫系统减弱，病毒就有可能再次被激活。原因很可能是幼儿免疫系统尚不完善，而免疫系统的形成需要数年时间。
学校生活为这种疾病的发生提供了更多先决条件，尤其是在青少年时期，因为那时年轻人会积极练习接吻。但在3岁以上的儿童中，这种疾病很少出现无症状。在大多数情况下，医生会遇到具有特征性症状的传染性单核细胞增多症患者。
尽管这种病症可能持续较长时间（约2个月），但危险性不高，无需使用强效药物。医生会开一些抗炎和抗病毒药物，如果合并细菌感染，则会寻求抗生素的帮助。顺便说一句，在这种情况下不建议使用青霉素，因为它们可能会引起皮疹。
不要以为儿童或青少年感染传染性单核细胞增多症就意味着爱泼斯坦-巴尔病毒已在他们体内扎根。这种疾病还有其他不太常见的病原体，例如巨细胞病毒（疱疹病毒5型）。为了了解他们的情况，医生会建议进行爱泼斯坦-巴尔病毒检测，并在必要时进行其他实验室检查。
传染性单核细胞增多症并非EB病毒在儿童期的唯一表现。其他疾病也与这种病原体有关，但在我们地区，这些疾病并不常见。
因此，伯基特淋巴瘤（EBV 病毒的发现源于此）主要见于非洲国家儿童，在美国非常罕见，在欧洲则更为罕见（而且只有在艾滋病的背景下才会出现）。颌骨肿瘤伴有淋巴结、肾脏和其他器官的损害，常见于 3-8 岁儿童。
鼻咽癌、相当一部分其他淋巴瘤、口腔毛状白斑——所有这些都是 EBV 在免疫力大大降低的背景下的表现，而这种免疫力降低伴随 HIV 感染及其后期艾滋病出现。
先天性免疫缺陷加上爱泼斯坦-巴尔病毒的感染，是一种危险的混合疾病，可能导致儿童患上增生综合征。在这种情况下，B淋巴细胞数量的增加会导致许多器官出现颗粒，从而阻碍其正常运作。这是一种死亡率很高的疾病，但它不会在正常免疫力的背景下发展。
可以说，儿童时期感染爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）的危险性主要体现在免疫缺陷病例中，因为这种病毒会引发各种并发症。在大多数情况下，感染仅限于传染性单核细胞增多症。虽然不需要特殊治疗，但医生仍然倾向于确定病原体的类型，并会建议孩子进行常规血液检查、酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应（PCR）检测。
由于原发性感染主要发生在儿童时期，因此很可能只需进行全血细胞计数和 PCR 检查，这在首次发现疾病时非常有用。
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正常的表現
PCR分析结果可通过电泳或使用标记的“引物”进行处理。在后者情况下，只需添加试剂（发色团），并通过颜色判断样本中是否存在病毒体即可。当在所研究的样本中检测到不同长度的DNA链时，电泳结果为阳性。
在疾病潜伏期和无症状病毒携带者中，PCR检测结果可能为阴性，即使在体内完全没有病毒的情况下也是如此。在原发性感染发展初期和早期阶段，实时PCR检测结果可能为阳性或阴性，这并不能说明任何问题。
然而，在疾病中期（急性期）、慢性病程或病毒复发（加重期）以及非典型病例中，检测结果可能呈阳性。如果患者患病时间较长，且体内病毒处于非活性状态，PCR检测结果将呈阴性，也就是说，在此期间以及疾病早期进行此类检测也不合适。
必须指出的是，只有在原发性感染且不存在其他病毒的病毒体的情况下，才有可能获得此类实验室研究的准确结果。
现在，关于EB病毒的酶联免疫吸附试验。它有相同的要求。体内存在5型或6型疱疹病毒、弓形虫病和HIV感染，可能会对结果造成影响，其严重程度不亚于分析时的粗心大意或所用试剂的质量问题。在这种情况下，可能需要进行额外的研究，并考虑可能的病原体。
检测结果正常，表明体内没有病毒，这四项检测结果均为阴性：IgG EA、IgM VCA、IgG VCA 和 IgG EBNA。是的，每项检测都需要单独进行，因为抗原会在疾病的不同时期出现。有时可能只要求进行单项检测，但大多数情况下，四项检测都需要在疾病的不同时期进行。
例如，在疾病的潜伏期，以及在没有感染的情况下，血液中检测不到四种抗体。这样的结果并不充分，因为它无法区分初次患病的人和健康人。
原发病初期，血液中仅出现IgM型VCA抗体，疾病早期，IgG型VCA抗体加入其中。
原发感染急性期会形成三种类型的抗体：IgG VCA、IgM VCA 和 IgG EA，其中检测到的针对衣壳抗原的 IgG 抗体数量最多。疾病急性期过后，抗体组成会维持六个月，但 IgM VCA 的数量会逐渐减少至零。
发病六个月后，血液中出现IgG EBNA抗体，而IgG EA免疫球蛋白越来越少，IgM VCA完全缺失。
在慢性疾病或病毒复发的情况下，可能会出现不同的指标。通常情况下，血液中会检测到所有四种抗体。但也可能检测不到免疫球蛋白IgM、VCA和IgG、EBNA。
由于缺乏 IgM VCA 抗体，并且并非所有病例都能检测到 IgG EBNA 免疫球蛋白，因此肿瘤过程会导致病毒感染的并发症。
但酶联免疫吸附测定法不仅能测定某些抗体的存在，还能测定其浓度，从而使我们能够更准确地判断病理的阶段及其可能造成的后果。这里无需讨论具体的数字。毕竟，每个实验室都采用不同的方法和试剂进行分析，因此不同实验室的分析结果在数字格式上可能存在差异。
需要给患者提供一份标明阈值（参考值）的表格。如果结果低于阈值，则视为正常（阴性）。如果测定值高于参考值，则结果为阳性，这意味着病毒仍在体内。测定值的大小表明疾病的阶段以及EBV病毒在体内的定植情况，即病理的严重程度。
如果 ELISA 检测结果为阴性，则仅表示该人过去未接触过 EBV。但无法确定病毒目前是否存在于体内。阴性结果可能是由于病原体在体内潜伏或无症状病毒携带者造成的。有时，为了确保体内没有病毒，需要一段时间后进行第二轮检测。
如果EB病毒ELISA检测结果仅略高于参考值，则结果值得怀疑。原因通常是疾病处于早期阶段，或体内存在其他病毒的病毒体。在这种情况下，建议两周后再次进行EB病毒检测，并可能检测其他病原体。