臍帶血造血幹細胞

臍帶血作為造血幹細胞的來源對造血細胞的增殖能力和再增殖能力起作用。一再表明出生時臍帶血液中含有足夠多數量的弱定向祖細胞造血。一些作者認為移植臍帶血造血幹細胞的優點是不需要尋找與HLA抗原相容的供體。據他們的新生兒的免疫系統引起的不成熟降低免疫活性細胞的功能活性，因此，比在骨髓移植，嚴重反應“移植物抗宿主”的發生率較低。在臍帶血此細胞移植存活不超過骨髓細胞下，即使在使用每1kg患者體重施用較小數量GSK的情況下。然而，在我們看來，問題的最佳數量移植必需的收件人，他們的免疫兼容性，以及一些臍帶的造血幹細胞移植等方面的血液需要更認真的分析的身體有效地移植臍帶血細胞。

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獲得臍帶血造血幹細胞

用於獲得的臍帶血的造血幹細胞的方法產生和從胎盤它的分離，之後立即需要它的進氣當胎盤是在子宮內或子宮外，以及用於剖腹產，而且子宮外。結果表明，在從出生到胎盤從胎盤分離到30秒的時間減少的情況下，獲得的臍血量平均增加25-40毫升。隨著後面的程序，相同數量的血液丟失。據確定，兒童早期脫離後遺症不會對新生兒造成任何負面影響。

血液學俄羅斯科學研究院和輸血開發有效和低成本的技術兩個臍帶血在生理譜系（（70.2 + 25.8）ml）和剖宮產（（73.4 + 25.1））溶液中。分別（83.1 + 9.6）和（83.4 + 14.1）％， - 用於與單核細胞和有核的足夠高的產率的臍帶血分離方法。分別（96,8 + 5,7）和（89.6 + 22.6）％， - 用於臍帶血冷凍保存的改進方法，這確保單核細胞和CFU-GM的高安全性。確定了使用“Kompoplast-300”容器（俄羅斯）的臍帶血採樣的排水方法的有效性。圍欄臍帶血作家誕生和從胎盤分離出來後立即進行，在放置在子宮內或子宮外胎盤的條款。70％的乙醇 - 一旦與碘的5％酊，然後處理兩次臍靜脈臍帶穿刺之前。血液自發地通過連接管流到容器。籬笆的持續時間不超過10分鐘。66收集排水體積方法臍帶血樣品平均（72 + 28）毫升，樣品中白細胞的數目平均為滿 - （1.1 + 0.6）X X 107的臍帶血的無菌性（細菌污染的分析， HIV-1只在一個樣品中的病毒肝炎B和C，梅毒，和巨細胞病毒感染）的被確定的IgG抗體以丙型肝炎。在另一項研究中，一旦胎盤在出生後胎兒表面放置一個特殊的幀向下，帘線用5％碳酸氫鈉處理上碘和75％乙基 次酒精。用輸液系統的針頭（G16）將臍帶靜脈排出。血液自發地排入容器。以這種方式採取的血液量平均（55 + 25）毫升。紙張G. Kogler等人（1996）臍帶血採取閉合方式並獲得大體積的血液 - 平均（79 + 26）毫升。作者指出，間574臍帶血樣品含有超過40毫升的血液，這不允許使用它們用於移植少約7％。K.磯山等人（1996），通過使用注射器活性exfusion服用臍帶血，接收69.1毫升血液的平均（臍帶血體積為15至135毫升變化）。最後，在平均94毫升臍帶血（由56至143毫升），得到A.阿卜杜勒Mageed PI合作者（1997）由punovinnoy靜脈插管。

為了減少開發的基於廣泛使用的transfuzioinoy系統巴克斯特保健公司，伊利諾斯州迪爾菲爾德（USA）上的封閉系統採血母體分泌物醫源性感染和污染的風險，含有62.5毫升CPDA（檸檬酸鹽 - 磷酸鹽 - 葡萄糖與腺嘌呤）作為抗凝血劑。用於製造材料的技術是用於相對於的細胞懸浮液的含量和純度的量的質量樣品的製備極為重要的。臍帶血收集的現有的方法，kotoryeuslovno分為封閉，半開放和開放系統sleduetotdavat偏好首先，如在一封閉系統顯著降低了材料的微生物污染的母細胞的細胞懸浮液的風險，以及污染。

A. Nagler和合著者（1998）對所有三種臍帶血採樣系統的功效進行了比較分析。在第一種變體中，該過程是在密閉系統中通過將血液直接排入容器中進行的。在第二種變體中，臍帶血通過注射器1的活性血液灌流方法獲得，進一步洗滌胎盤的靜脈並同時將血液排入容器（開放方法）。在第三種變體中，通過用注射器主動提取血液並通過臍帶動脈沖洗同時將血液輸送到容器中，以半開放系統抽取血液。在第一版中，作者接受臍帶血量為（76.4±32.1）ml，白細胞計數為（10.5±3.6）×10 ⁶ / ml的血液。在第二種變體中，相應的指數分別為（174.4±42.8）ml和（8.8±3.4）×10 ⁶ / ml; 在第三 - （173.7 + 41.3）ml和（9.3 + 3.8）×10 ⁶ / ml。當使用開放式系統時，注意到最常見的臍帶血樣品感染。建立胎盤質量和提取血量之間的直接相關性 - 隨著胎盤質量的增加，收集的血液量增加。

臍帶血取樣後，分離步驟如下 - 分離單核細胞並從紅細胞中純化細胞懸浮液。在實驗條件下，有核細胞通過用氯化銨溶解銨紅細胞期間用甲基纖維素沉澱的方法分離。但是，出於臨床目的，不應使用甲基纖維素，因為造血幹細胞的損失達到50-90％。裂解與大量在門診也幾乎不進行工作溶液的連接的紅血細胞，雖然分離的以這種方式的百分比有核細胞與CD34 +的表型，和祖細胞CFU-GM的功能和CFU-GEMM高得多。已經報導了在密度梯度購買密度溶液（BDS72）中分離單核細胞的新試劑。該物質具有以下生理參數：pH-7.4，滲透壓 - 280 mosm / kg，密度 - 1.0720 g / ml。據作者說，在其幫助下，可以分離多達100％的CD34陽性細胞並去除98％的紅細胞。但是，該診所尚未使用BDS72。

從臍帶血測試的有核細胞的分離方法，通常使用10％的HES溶液或3％的明膠溶液。兩種情況下紅細胞沉澱和有核細胞分離的效率大致相等。然而，在使用作為沉降劑明膠可能的情況下，獲得稍微更大數目CFU-GM，使用HES時比。據推測，在回收效率CFU-GM不相等的速度由於吸收在造血細胞表面受體各個級分或有核細胞的能力HES分子的沉積並因此差分阻斷它們到細胞集落刺激因子，其在體外培養CFU-GM時使用的靈敏度。儘管如此，當製造大型臍帶血庫時，兩種沉澱劑都可能適合分離有核細胞。

原則上分離和冷凍保存臍帶血的方法與用於成年供體的外周血和骨髓的造血幹細胞的工作沒有區別。但是當為其銀行準備大量臍帶血樣時，分離的方法必須首先是低成本的。因此，現在不幸的是，由於臨床需要已經使用了常規的臍帶血細胞分離和冷凍保存方法，而且更有效但經濟有效的方法仍然是大量實驗人員的問題。

一般來說，建立了估計造血細胞數量的標準和研究臍帶血樣本的要求，以確定感染因子。為了確保造血臍帶血細胞的移植，必須對所有血液樣本進行主要檢查以檢測血行感染和遺傳疾病。有些作者建議的臍帶血研究的額外的特殊方法對遺傳性疾病如地中海貧血和鐮狀細胞性貧血，腺苷脫氨酶缺乏症，丙種球蛋白血症布魯頓，病Harlera和船夫診斷的目的。

根據建議Ticheli L.等人（1998），臍帶血在每個樣品中，需要確定有核細胞，SB34陽性細胞和CFU-GM的數量，攜帶HLA分型，以確定ABO血型和Rh其成員。此外，接種攜帶HIV和巨細胞病毒感染，乙肝表面抗原，丙型肝炎，HTLY-I和HTLV-II（T細胞白血病，人），梅毒，弓形體病細菌，血清學試驗。鉅細胞病毒和HIV感染的聚合酶鏈反應是強制性的。

嚴格按照醫學生物倫理學的原則進行獲取臍血的手術。在採血開始之前，有必要徵得孕婦的同意。初步交談孕婦獲得知情同意執行所有操作，因為血液exfusion灌裝和整理文件僅由衛生專業人員進行。在任何情況下，不允許用生物，化學，醫藥等非醫學教育，針對違反生物倫理和人權的既定準則人員在執行任何這些程序。用於載波HBsAg陽性的測試中，抗體丙型肝炎的致病因子，HIV和梅毒臍帶血沒有被採用，並且將收集的血液樣本已被放棄並銷毀。應當指出的是，潛伏感染的新生兒車廂較成人少得多，因此，血行轉移和臍帶血細胞的造血輸注的感染性並發症的發展的可能性比成人捐贈者的骨髓移植的情況下顯著降低。

在臨床臍帶血應用的一個重要的一點是接枝，這是基於臍帶血細胞的樣品中的造血幹細胞的定量，需要移植的劑量的評估。尚未開發移植所需的最佳臍帶血細胞數標準。即使在例如CD34陽性細胞和CFU-GM的常規參數上也沒有普遍接受的觀點。一些作者評估造血細胞的電位由長期培養物的分析以確定共同的粒細胞，紅細胞，單核細胞和巨核細胞集落形成單位的內容的 - CFU-GEMM。

然而，在臨床情況下，臍血移植的標準評估通常只包括確定有核細胞或單核細胞的數量。

保存臍血造血幹細胞

造血臍血細胞儲存技術存在一些問題。當造血幹細胞，以達到它們的最佳冷凍模式必須最小化的臍帶血和先前除去，以避免溶血紅血細胞的數量和紅血球抗原（ABO，RH）的不相容性反應的危險的冷凍保存。為了這些目的，用於分離有核細胞的各種方法是合適的。在早期的上個世紀90年代基於在Ficoll具有1.077的密度克/毫升，或滲濾與密度1.080克/ ml的密度梯度分離的有核細胞的最廣泛使用的方法。分離臍帶血通過密度梯度允許選擇主要單核細胞，但導致造血祖細胞的相當大的損失 - 高達30-50％。

羥乙基澱粉在臍帶血細胞分離過程中的沉降效率以不同的方式估算。一些作者指出使用這種方法的分離質量低，而其他研究人員，相反，在所有可能的方法中，傾向於使用6％的羥乙基澱粉溶液精確分配HSC臍帶血。這突出顯示了造血細胞沉澱的高效率，根據一些數據，這些細胞的沉積率從84％達到90％。

另一種觀點的支持者認為，幾乎所有的分餾工藝涉及大的損失yadrosoderzhashih細胞，並提供通過離心，臍帶血分離成3個餾分，使分離：紅細胞，白細胞和血漿環。分離以這種方式的細胞，本發明人已經發現，早期造血祖細胞和細胞與CD34 +免疫的單核細胞的最終含量分別為90，88和原始水平的100％。純化生長的相似量在由其他研究人員獲得的臍帶血細胞的這個方法：沉澱後有核分配92％，98％ - 單核，96％ - CD34陽性細胞和菌落形成單位106％。

在20世紀90年代後期，明膠被廣泛用作沉澱劑。在臨床實踐中，使用自1994年以來從臍帶血中分離明膠造血幹細胞。當使用3％的明膠溶液時，有核細胞的分離效率達到88-94％。明膠在臍帶血庫開發中的廣泛應用證實了其優於其他沉降劑的優勢。所有的有核細胞的分離在其在每個測試臍帶血樣品的順序使用的術語上述方法的比較分析表明，最佳sedimenter出的單核細胞用的表型CD34 + / CD45 +，以及由CFU-GM和CFU-GEMM的數量為3％明膠溶液。它被證明是使用Ficoll密度梯度顯著較少有效的方法，以及利用甲基纖維素和羥乙基澱粉，其中造血細胞損失達到了60％。

臍帶血幹細胞移植體積的擴大不僅與其生產方法的發展有關，而且與儲存有關。與長期儲存臍帶血的製備直接相關的問題很多，並且其樣品的最佳冷凍保存技術的選擇也很多。其中包括執行分離程序的便利性，各種冷凍保存介質的使用以及使用製備用於移植的解凍細胞的方法的問題。原生臍血樣本的運輸通常從遠離血液中心的地區進行。與此相關，從臍帶血儲存開始到冷凍保存開始允許存放臍帶血的時間出現問題，這對於開發臍帶血庫尤為重要。

在液氮中造血臍帶血細胞後的長期儲存（12歲以下）的功能活性的研究顯示，在此期間，造血細胞的約95％的不喪失其高的增殖能力。紙張S. Yurasova等人（1997）證明了在室溫下儲存（22℃）或在4℃下放置24小時和48小時臍帶血基本上不降低的造血細胞的存活性，初始電平是適當地92和88％。然而，如果儲存時間延長至三天，則臍帶血中存活的有核細胞的數量顯著減少。同時，在其他研究中發現，當在22或4℃的溫度下儲存2-3天時，成熟粒細胞而不是造血細胞的活力主要影響。

臍帶血造血幹細胞的生存能力可能受到系統組件對其收集的不利影響。的不同的抗凝血劑的效果，這作用機制是由於鈣離子（ACD，EDTA，XAPD-1）在24至72小時臍帶血儲存條件造血祖細胞的結合分析表明有核細胞的生存力的負面影響。在這方面，作者建議在加入天然肝素的無防腐劑以20單位/毫升，這在他們的意見，使得有可能增加的存儲未分級的臍帶血起來的持續時間至72小時，並保存的菌落形成單位的功能活性的濃度使用PBS（磷酸鹽緩衝溶液）的。然而，在保護CFU-GM和CFU-G的研究示出冷凍保存之前臍帶血儲存時間應不超過9個小時。顯然，在這種情況下應該採取行動的原則是，如果有矛盾的數據應該使用推薦的最小存儲臍帶血的生活和為快速啟動可編程冷凍分離的細胞成為可能。

當凍結臍帶血的造血幹細胞時，通常使用10％的DMSO溶液作為冷凍保護劑。但是，除了表達的冷凍保護作用之外，即使在最低限度暴露於臍帶血的血液形成細胞的情況下，該濃度下的二甲基亞砜也具有直接的細胞毒性作用。為了減少DMSO的細胞毒性作用，應用零暴露溫度，所有操作的速度增加以及解凍臍帶樣品後重複洗滌。

烏克蘭醫學科學院血液學和血液學研究所自1995年以來一直在開發科學方向，其目標是研究臍血作為乾細胞造血細胞的替代來源。特別是，開發了低分子量低溫冷凍保存未分級和分級臍帶血造血細胞的新技術。作為防凍劑，使用低分子量醫用聚乙烯吡咯烷酮。低分子量臍血冷凍保存方法基於冷凍保存細胞的原始製備技術和移植前細胞懸液的特殊處理技術。

影響冷凍保存的造血幹細胞功能活性水平的最重要因素之一是細胞懸液的冷卻速率，特別是在結晶階段。解決冷凍速度和時間問題的軟件方法為建立簡單而高效的冷凍保存方法提供了極大的機會，而無需在移植前將細胞懸液從冷凍保護劑中洗滌出來。

立即凍結和融化的階段對細胞在其製備期間的活力是最危險的。當冷凍造血細胞時，細胞間介質從液體轉變為固相 - 結晶時，其中很大一部分可被破壞。為了降低細胞死亡的百分比，使用了防凍劑，其作用機理和防凍效果在科學文獻中得到了充分的闡述。

骨髓和臍帶血細胞的冷凍保存的有前途的方向優化技術是在相同的溶液，以低濃度的冷凍保護劑的與作用的幾種不同的機制結合起來，例如，作用於DMSO的細胞內水平和羥乙基澱粉或白蛋白具有細胞外封閉效果。

臍帶血細胞的冷凍保存傳統上使用20％DMSO溶液，其在冰浴中永久地機械攪拌，緩慢倒入細胞懸浮液，以實現等於（1：1）的細胞懸浮液和防凍劑的體積比。二甲基亞砜的最終濃度是10％。然後將細胞懸液在軟件低溫恆溫器上以HS / min的速度冷卻至-40℃，然後將冷卻速率升高至10℃/ min。達到-100℃後，將裝有細胞懸浮液的容器置於液氮（-196℃）中。用這種低溫保存方法，解凍後功能活躍的單核細胞的安全性達到初始水平的85％。

冷凍保存方法的修改旨在通過加入羥乙基澱粉來降低DMSO的濃度（二甲基亞砜和羥乙基澱粉的終濃度分別為5％和6％）。當髓樣細胞的懸浮液冷凍時，觀察到這種冷凍保護劑組合的高效率，沒有比單獨的10％二甲基亞砜溶液更少的細胞保護作用。活性有核細胞的數量達到基線水平的96.7％，並且其通過CFU-GM的數量估計的功能活性為81.8％。

當使用濃度範圍從5到在用4％羥乙基澱粉（最終濃度）的組合10％二甲亞砜溶液發現，在這些範圍內的CD34陽性細胞的保存二甲基亞砜幾乎不變。在5至2.5％減少DMSO的濃度的條件的同時，觀察到的臍帶血細胞的大量死亡 - 活細胞單元的數目從85.4降低到12.2％。其他作者還得出結論，它是二甲亞砜的5和10％的溶液（在版權實施例 - 在與自體血清的組合）以最高的效率臍帶血HSC的冷凍保存過程中提供細胞保護作用。此外，高安全性依次冷凍和解凍細胞被標記為5或10％DMSO 4％羥乙基澱粉溶液組合的情況下，特別是在的TOS /分鐘受控的冷卻速率。在使用由三種成分的已冷凍保護溶液另一紙 - 在1:1的比率DMSO，純化的人白蛋白和RPMI培養基：4：5，將其加入到細胞懸浮液到等體積的比（最終DMSO濃度為5％）。在溫度為+ 4°C的水浴中解凍後，CFU-GM的安全性超過了94％。

一些作者建議使用未分級的臍帶血進行冷凍保存，因為在去除紅細胞期間會有大量的造血細胞丟失。在該實施方案中，使用10％的二甲基亞砜溶液來保護單核細胞免受低溫結晶的破壞作用。冷凍以恆定的HS / min冷卻速度至-80℃進行，然後將臍帶血細胞懸液浸入液氮中。用這種冷凍方法，發生紅細胞的部分裂解，因此血液樣品不需要分餾。解凍後，將細胞懸浮液在游離血紅蛋白和二甲基亞砜中在人白蛋白溶液或患者的自體血清中洗滌並用於移植。

除霜普通臍帶血後造血祖細胞的保護確實比分級高，但與紅血細胞的krioustoychivostyu連接可能會導致嚴重的問題，如ABO血型不合的紅細胞輸血後輸血的結果。另外，儲存的普通血液的體積顯著增加。從臨床角度來看，冷凍保存仍然優選從造血臍帶血細胞的其他細胞部分預分離和純化。

特別地，一種方法是允許分餾除去紅細胞，以準備冷凍，它使用在組合物中plazmozameshchath溶液“Stabizol”一羥乙基澱粉6％溶液的臍帶血細胞的冷凍保存。解凍後，由此獲得的細胞懸液準備用於臨床使用而無需額外操作。

因此，目前有許多相當有效的臍血冷凍保存方法。主要區別在於血液樣品在製備階段冷凍未分級分離或分離成細胞組分，並收集沒有混合紅細胞的有核細胞。

臍血造血幹細胞移植

在80年代後期 - 上世紀90年代初期，發現在懷孕期間供應胎兒的臍帶血具有高含量的造血幹細胞特徵。獲得臍帶血細胞的相對簡單以及沒有明顯的倫理問題促進了臍帶血幹細胞在實際醫學中的應用。首次成功將臍帶血移植到範可尼貧血的兒童身上，成為擴大臍帶血幹細胞移植體積並創建銀行供應體系的起點。在全球臍帶血庫系統中，最大的是位於美國國立衛生研究院資產負債表上的紐約胎盤血液中心。該銀行儲存的臍帶血樣本數量接近20家LLC。接受者（主要是兒童）的數量也在增加，並且已經成功進行了移植。根據美國衛生部的資料，HSC臍血接受者移植後的無復發期已經超過10年。

這並不奇怪，因為臍帶血造血潛在的大量研究表明，早期幹細胞的數量和質量不僅不遜色於成年人的骨髓，也受到了一些措施超過它。臍帶血幹細胞的較高的增殖潛力引起發育細胞信號傳導特徵，受體在造血幹細胞的具體生長因子存在下，臍帶血細胞的能力，以自分泌產生的生長因子，大尺寸和端粒長度。

因此，在接收方臍帶血預定質量移入高電勢的供體的造血恢復的造血幹細胞的基因組和表型特徵。

臍帶血造血幹細胞的優點

其中在造血細胞的其它來源應該注意的風險幾乎為零供體的健康狀況（如果不這樣認為胎盤），同時消除全身麻醉需要用造血臍帶血幹細胞移植的真正好處。臍帶血的使用擴大了由於在HLA系統中部分相容的移植（從一種到三種抗原不相容）而引起的細胞移植的可能性。的造血臍帶血細胞的長期儲存在冷凍狀態下的技術中，這增加了獲得罕見HLA型的概率，並減少搜索時間HLA匹配的同種異體移植。同時，由傳播途徑傳播的一些潛伏感染的風險顯著降低。此外，與使用臍帶血細胞進行自體移植的可能性相比，還有一種便宜的生物保險形式。

然而，由於血小體積可從胎盤（平均不超過100毫升）中脫穎而出獲得嚴格遵守的臍帶血來源的樣品的細菌污染的風險最小的條件從臍帶靜脈的血液中的最大可能的量的問題被收集。

從臍帶血原始造血細胞一般是通過在其表面上glikofosfoproteina CD34存在來識別，它們的功能性質通過檢查體外產克隆測定或集落形成的基礎上。對比分析表明，在級分的CD34陽性單核細胞的臍帶血和骨髓最大含量分別在CD34 +細胞的亞群的集落形成單位1.6和5.0％時，最大電平 - 80和25％，CD34的總克隆效率+ - 細胞 - 88和58％時，最大的集落形成（在-populyatsii CD34 + HPP-CFC）與高增殖潛能細胞 - 50和6.5％。應該補充的是，CD34 + CD38 - 細胞和能力的克隆效率響應細胞因子刺激中的臍帶血造血幹細胞也較高。

組合的表型抗原THY-1，CD34和CD45RA確認臍帶血造血細胞的高增殖能力，和臍帶血細胞的表面上的三種抗原的表達表明它們屬於幹細胞。此外，已經確定臍帶血含有不具有線性分化標記的CD34 +表型的細胞。具有CD34 + / Lin表型譜的細胞亞群的臍帶血中的水平約為CD34陽性細胞總數的1％。造血臍帶血前體細胞產生了淋巴細胞系和多潛能骨髓系列的線性細胞分化，這也表明它們屬於乾細胞。

如已經提到的，骨髓和臍帶血之間的本質差異是用一種方法獲得的用於移植的造血細胞的量。當在分離過程中，冷凍保存，解凍細胞團的骨髓移植損失和測試是在40-50％的範圍內是允許的，臍帶血細胞，例如損失是非常顯著，採用數量不足HSC移植的時候可以是站不住腳的，因為。據G. Kogler等人（1998），用於在接受者體重10公斤潛在移植（所收集的臍帶血樣品的總數 - 2098）細胞移植可以是所有的臍帶血樣品，體重35公斤 - 67％，並且僅25％的樣本能夠為體重在50-70千克的患者提供有效的移植。這種臨床情況表明需要優化和改進現有臍帶血細胞採樣，生殖和儲存方法的有效性。因此，採樣方法，檢測，分離和臍帶血冷凍保存標準化的問題現在已廣泛在文獻中用於創建血庫，其在臨床上的使用，以及建立的條件和臍帶血造血幹細胞的存儲方面的討論。

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臍帶血造血幹細胞在醫學上的應用

通常，可以從臍帶血中分離多達10 ^6個造血幹細胞，很少更多。就此而言，直到今天，仍有許多造血臍帶血細胞能夠恢復成年接受者造血功能的問題。關於這個問題的意見分歧了。一些研究人員認為，該量足以用於移植的孩子，但太小移植成人，的量，施用是最佳的（7-10）×10 ⁶每1kg體重的CD34陽性細胞-平均7×10 ⁸每次移植。從這些計算結果可以看出，一個臍帶樣本的造血幹細胞比一個移植到成人患者所需的造血幹細胞少700倍。然而，這種定量評估是通過類比骨髓中的輸入細胞的數量來完成的，並且完全忽略了造血作用的遺傳特徵。

特別是，與骨髓造血前體細胞相比，忽略臍血造血幹細胞具有更高增殖潛能的事實。體外集落形成潛力的研究結果表明，單次劑量可以提供成人接受者的臍帶血造血重建。在另一方面，我們不應忘記，造血幹細胞的數目，即使在胚胎發育過程中降低：CD34陽性細胞在臍帶血含量線性降低5倍的期間20週（血液為研究在妊娠的過早終止的情況下，獲得）至40週妊娠（生理期的生育期），伴隨著線性細胞分化標誌物表達的平行，永久增加。

由於缺乏標準化的方法來定量臍帶血樣本中的祖細胞，所以對於造血臍帶血幹細胞的最佳劑量的爭議仍在繼續。一些研究人員認為，由於臍帶血樣本的標準選擇可以用於核細胞和單核細胞的數量，重新計算接受者的體重，那就是他們的劑量。一些作者認為即使進行HSC自體移植，CD34 +細胞的最小定量閾值也是2×10 ⁶ / kg。在造血細胞的劑量為5×10增加⁶個細胞/ kg（總共2.5）已經提供了更適合於早期移植後時期，減少感染並發症的發生率和縮短預防性抗生素治療的週期。

根據E.在血液學用於臍帶血細胞的移植成功格魯克曼等人，（1998）是引入至少3.7×10 ⁷每1公斤體重接受者的有核細胞。隨著造血幹細胞的劑量降低到每1kg體重1×10 ⁷和更少的有核細胞，移植失敗和癌症復發的風險急劇增加。應該認識到，在GSG同種異體移植後快速恢復造血功能所需的最小數量的祖細胞尚不清楚。理論上這可以使用一個單一的細胞來實現，但在臨床骨髓移植快速且穩定植入保證輸血至少（1-3）×10 ⁸每1kg患者體重的有核細胞。

最近一項詳細的研究確定了最佳的血液循環中HSC的數量，包括根據移植材料中CD34陽性細胞的含量分離出的三組患者的觀察結果。第一組患者接受（3-5）×10 ^6個細胞/ kg。第二組患者的HSC劑量為（5-10）×10 ⁶細胞/ kg，第三組患者接受移植超過10×10 ⁶ CD34 +細胞/ kg。在接受移植的受體組中，觀察到最佳結果，其中CD34陽性細胞的數量等於（3-5）×10 ⁶ / kg。隨著移植細胞的劑量增加至5×10 ⁶ / kg以上，沒有統計學上顯著的益處被確定。同時，移植物中的非常大的HSC含量（> 10×10 ⁶ / kg）與大量殘餘腫瘤細胞的回輸有關，這導致疾病復發。移植的同種異體祖細胞的數量與“移植物抗宿主”反應的發展之間沒有直接關係。

HSC臍帶血移植的積累世界經驗證實了其高再生潛能。臍帶血移植的植入率與引入的有核細胞的數量相關。在移植3×10 ⁷ / kg時觀察到最佳結果，而對於骨髓，這個劑量是2×10 ⁸ / kg。根據協調中心的數據，截至2000年底，世界上有1200個臍帶血細胞移植，主要來自捐獻者親屬（83％）。顯然，臍血應該被認為是骨髓移植給成血細胞瘤患者的替代方法。

然而，造血組織的新生性質科爾多瓦源鼓勵由於其GCW的功能特徵的存在。然而，只有臨床經驗可能會給出一個答案的臍帶血用於與造血發育不全收件人的成人造血重建的樣本是否足夠的問題。白血病和骨髓增生異常綜合徵，非霍奇金淋巴瘤，和成神經細胞瘤，再生障礙性貧血，先天性範可尼貧血和鑽石黑風扇，白細胞粘附，巴綜合徵，根達綜合症Harlera綜合徵，地中海貧血的不足：臍帶血細胞的移植在治療腫瘤和非腫瘤性質的許多疾病的使用。

密切關注和單獨的研究值得臍血血液形成細胞移植的免疫學方面。結果表明，在來自具有不完整HLA匹配的移植結果供體臍帶血幹細胞移植的情況下都相當滿意的，即，根據作者，表明較低的免疫反應性臍帶血比骨髓。

的臍帶血細胞組合物的詳細研究表明免疫系統和它們的功能活性的效應細胞的兩個表型譜的特徵，允許考慮臍帶血作為造血幹細胞的與反應的相對低的風險“移植物抗宿主”的來源。附加的特徵功能不成熟免疫活性臍帶血細胞應當指出的細胞因子產生的不平衡，在敏感性細胞因子的減少的免疫應答的新的調節。由此產生的細胞毒性淋巴細胞活性的抑制被認為是造成對移植的造血組織的免疫耐受形成的因素。在臍帶血淋巴細胞群體中，與成年供體的外周血和骨髓相反，非活性的，未成熟的淋巴細胞和抑制性細胞占主導地位。這表明臍帶血T淋巴細胞對免疫應答的可用性降低。臍帶血細胞的單核細胞群的一個重要特徵是功能完整和活性抗原呈遞細胞的含量低。

在一方面，低度臍帶血讀數免疫系統的效應細胞的成熟度延伸到其在臨床上使用，因為這些功能允許在供體和受體細胞之間的免疫衝突的強度的降低。但是，在另一方面，我們知道反應“移植物抗宿主病”和移植抗腫瘤作用，即，“移植物抗白血病”發展的影響程度之間的相關性的存在。與此相關，進行了臍帶血細胞的抗腫瘤細胞毒性研究。結果表明，儘管臍帶血細胞對抗原刺激，首先啟動的真正削弱免疫反應是積極參與實施抗腫瘤的細胞毒性的機制，自然殺傷細胞和killeropodobnymi細胞。此外，在臍帶血淋巴細胞亞群被發現與所述表型CD16 + CD56 +和CD16“TCRA / P +。假設這些細胞在活化形式實現反應”移植物抗白血病“。

在腫瘤研究所，烏克蘭科學院醫學科學院的臍帶血造血凍存細胞，給予癌症患者因化療和放療造血持續發育不全。在這些患者中，臍帶血造血幹細胞移植有效恢復血液壓迫，通過在外周血成熟形成元素的持續升高，以及表徵細胞和體液免疫的狀態增加的指標所證明的。臍血造血細胞移植後再增殖效應的穩定性允許持續放射和化療而不中斷治療過程。有更高的效率同種異體幹細胞的臍帶血癌症患者的證據：他們使用腫瘤復發的年度風險為25％和40％的患者移植的異體骨髓基因。

冷凍保存的臍帶血幹細胞的作用機制應被視為引起新生兒細胞對自分泌產生的造血生長因子的獨特能力，以及供體細胞的臨時植入的結果（作為確認造血接收者的體液刺激的結果 - 在外周血胎兒血紅蛋白收件人7-15的內容的顯著增加與基線數據相比，輸血後一天）。缺乏臍帶血後輸血反應的收件人 - 免疫細胞的相對寬容，以及信心的標準冷凍保存生物材料的有用的結果。

祖細胞T淋巴細胞，其用於開發誘導抗腫瘤細胞毒性淋巴樣細胞用於隨後的移植免疫治療的新體外和體內方法外源性細胞因子刺激的影響下能夠活化的殺傷臍帶血。此外，臍血免疫細胞的基因組中的“不成熟”，允許他們通過分子模擬增強抗腫瘤活性的。

今天，臍帶血主要用於兒科血液學。在相比於骨髓同種異體移植物的臍帶血造血幹細胞的急性白血病同種異體移植兒童，顯著降低反應的發生率“移植物抗宿主”。然而，中性粒細胞減少和血小板減少的時間較長，並且不幸的是，移植後100天死亡率較高。在外周血粒細胞和血小板的恢復的較長時期可能是由於臍帶血CD34陽性細胞的個別亞群的分化不充分，通過放射性羅丹明和其表面上CD38抗原的表達低的吸收水平低所證明的。

與此同時，成人患者的臍帶血造血幹細胞，由於缺乏這兩種兼容的親緣骨髓供體，以及機會動員自體造血幹細胞進行移植表現出較高的年無復發生存率30歲以下的患者（73％） 。擴展受者年齡範圍（18-46歲）的存活率下降至53％。

與表型CD34 +骨髓和臍帶血細胞的定量分析表明更高（3.5倍）其在骨髓中的內容，但臍帶血表明細胞與CD34 + HLA-DR .Izvestno的表型譜，chtokletkikrovisimmunologicheskimi標記CD34一個顯著優勢+ HLA-DR增殖比用免疫CD34 + HLA-DR +細胞多種活性，如在體外造血細胞的長期培養物的生長的實驗性研究證實。包含在臍帶血和骨髓與表型CD34 + CD38原始細胞祖細胞，但臍帶血細胞與設置CD34 + CD38標記具有比相同的表型的造血細胞，從成人供體骨髓分離的克隆形成更高的活性。此外，臍帶血細胞與CD34 + CD38免疫將響應於刺激細胞因子（IL-3，IL-6，G-CSF）增殖並在比骨髓細胞的長期培養物中繁殖7倍以上的菌落。

臍血幹細胞庫

對於實際的醫學新領域的正常發展 - 臍帶血幹細胞的移植，以及開展造血骨髓幹細胞移植，你必須有一個廣泛的血庫，這是已經確立了在美國和歐洲的網絡。Netcord銀行協會將國內臍帶血庫網絡聯合起來。建立臍帶血庫的國際協會的可行性由執行無關的移植需要大量的輸入臍帶血樣本中，允許選擇HLA相合供者的事實來確定。只有建立銀行系統，儲存不同HLA類型的血液樣本，才能真正解決尋找必要捐贈者的問題。組建這樣一個臍血庫需要初步製定道德和法律規範，目前正在國際層面進行討論。

為了在烏克蘭建立臍血庫，有必要製定一些規定和文件。

首先，這些是標準化臍帶血採樣，分離和冷凍方法的問題。有必要按照醫學倫理的要求，對產科醫院臍帶血採樣規則進行規範，確定保證成功移植的最低臍血量。應當比較和質量評估和造血祖細胞以及HLA分型的方法和可通過臍帶血細胞的輸注來發送遺傳和傳染病的診斷方法的許多不同的條件標準化設置一般選擇標準健康供體。另外值得討論的是為血清，臍血細胞和DNA創建獨立的儲存設施。

絕對有必要組織臍帶血數據計算機網絡，實施與骨髓捐獻者登記冊的關係。為了進一步開發細胞移植學，應開髮用於比較來自HLA相同親屬和不相關供體的臍帶血和骨髓移植結果的特殊方案。在臨床使用臍帶血細胞的倫理和法律問題的處理可以幫助規範文件，包括父母的知情同意書，以及由遺傳和/或感染性疾病標識的孩子的母親或親戚的通知。

細胞移植在烏克蘭的發展，該判斷條件將是幹細胞的捐獻和國際合作，通過捐贈者的骨髓世界協會（WMDA），國美供體骨髓計劃（NMDP）和其他寄存器等國的發展通過國家計劃。

泛化的臍帶血造血幹細胞移植的還是短暫的歷史，我們注意到的臨床應用臍帶血的可能性，第一個假設，在70年代初提出，在80年代被證實在動物實驗研究結果，並於1988年今年已經進行了世界上第一個人臍血造血幹細胞移植，然後開始發展臍帶血銀行的全球網絡。10年後，患者的移植的造血細胞，臍帶血接近800其中數分別為患者的各種腫瘤性疾病（白血病，淋巴瘤，實體瘤）和非腫瘤（先天性免疫缺陷，貧血，代謝紊亂相關的疾病）的性質。

在臍帶血中，早期和定型的細胞祖細胞的含量高於成人的外周血。通過粒細胞 - 巨噬細胞集落形成單位的數量和它們的臍帶血增殖潛力比成人的外周血大得多，即使生長因子之後施用。在體外長期細胞培養中，臍帶血細胞的增殖活性和存活力比骨髓細胞更高。在臍帶血幹細胞的移植中的關鍵時刻是造血潛能數量和有核細胞，巨細胞病毒感染，HLA-兼容供體和受體，體重和患者的年齡的存在。

儘管如此，為了治療嚴重的血液疾病，特別是兒童，臍血幹細胞移植應被視為骨髓移植的替代方案。臍帶血細胞的移植的臨床問題逐步得到解決 - 已經有相當高效的採樣技術，分離和臍帶血細胞的冷凍保存，對於臍帶血庫的形成提供了條件，測試方法改進的有核細胞。創建銀行時，最好採用大規模採購臍帶血造血幹細胞進行分離，應考慮3％明膠溶液和6％羥乙基澱粉溶液。

Perehrestenko P.等人（2001）正確地指出，臍帶血幹細胞的移植應採取其應有的位置在複雜的治療措施來克服各種來源的造血抑鬱，作為GSK臍帶血在許多顯著優點，其中重要的是相對容易收穫的不同，有供體，新生兒細胞病毒和移植的費用相對較低的低污染沒有風險。一些作者提出，臍帶血細胞的頻率低於骨髓細胞移植是伴隨著以“移植物抗宿主”的反應，這是由於，在他們看來，在HLA-DR抗原和的臍帶血細胞的弱表達相關的並發症的不成熟。儘管如此，臍帶血的有核細胞的主要群體是T淋巴細胞（SDZ陽性細胞），其含量為約50％，這比在成人的外周血少20％，但是從這些T細胞亞群的表型差異來源是微不足道的。

在直接影響的臍血幹細胞移植生存的因素，我們應該注意到的患者（最好的結果是看到年齡在長達5年的收件人），疾病的早期診斷年齡和白血病的一種形式（效率，急性白血病是顯著更高）。重要的是成核的臍帶血細胞的劑量，以及它們與受體的HLA相容性。它是在腫瘤學和血液病的臨床療效臍血移植GSK的無事故分析顯示最佳的治療效果使用相關的移植：一年在這種情況下無病生存率達到63％，而無關移植 - 只有29％。

因此，大量的在臍帶血和高repopulyatsionnaya能力新生兒造血幹細胞的幹細胞的存在使它們適合於在患者的血液惡性腫瘤異基因移植。然而，請注意，造血的臍帶血造血幹細胞的移植後重演“被拉伸在時間”：外周血嗜中性粒細胞恢復的內容通常發生朝向第6週的端部，和血小板減少的現象消失，通常在6個月後。此外，臍帶血未成熟血形成細胞不排除免疫衝突：分別在23觀察到的急性和慢性反應“移植物抗宿主”的嚴重當然和收件人的25％。在26％的病例中註意到臍帶血細胞移植後第一年結束時急性白血病的複發。

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