疱疹的诊断

疱疹的诊断基于敏感细胞培养中的经典病毒分离、免疫荧光和血清学方法、阴道镜检查以及使用现代分子生物学方法（PCR，斑点杂交），可以诊断整个疱疹病毒组，包括 HHV-6 和 HHV-7 类型。

疱疹感染的实验室诊断方法

分离 HSV 或检测病毒颗粒和/或其成分的主要方法	检测人体生物体液中 HSV 抗体的辅助方法
在敏感细胞和动物培养物中分离 HSV 直接和免疫电子显微镜 国际音标 (IPA) 的直接和间接变体 独立财务顾问 分子生物学方法 乳胶凝集反应	中和反应 RSC HSV-1、2非结构蛋白抗体的测定

研究表明，76% 的生殖器疱疹 (GH) 患者由 HSV-2 引起，24% 由 HSV-1 引起。此外，仅有 22% 的患者为 GH 单一感染，78% 的病例检测到微生物共感染。46% 的病例检测到由两种病原体引起的寄生虫病，其中 40% 的病例检测到衣原体。涂片中检测到加德纳菌、滴虫和淋球菌的几率较低。

27% 的患者寄生虫病由三种病原体引起，5.2% 的患者由四种病原体引起。此外，衣原体与加德纳菌和念珠菌的混合感染最为常见。这些数据证实，有必要对 GH 患者进行全面的细菌学检查，以确定病原体的组合，并深入研究泌尿生殖道混合感染的发病机制，以便针对疱疹感染制定针对性的综合治疗方案。

根据疱疹病变的定位分离 HSV 的材料研究

病变定位	囊泡内容物	细胞刮取				脑脊液	支气管抽吸物	活检	血
		1	2	3	4
皮革	+								+
眼睛			+						+
生殖器				+					+
肛门	+				+				+
嘴	+	+							+
中枢神经系统	+					+		+	+
肺		+					+		+
肝								+	+
先天性 疱疹	+	+	+				+		+

巨细胞病毒感染的实验室诊断方法

方法	获得结果所需的时间	笔记
病毒学
电子显微镜	3小时	不太容易接近
细胞培养中的病毒分离（VCI）	4-20天	标准， 慢速
使用单克隆抗体对早期 AG 进行免疫荧光染色	6小时	不太 具体
细胞学	2-3小时	不太 具体
血清学
RSC	2天	标准
区域遗传算法	1天	劳动密集型
礁	6小时	简单、 具体
国民收入保险基金	6小时	难的
RIMP	6小时	难的
ELISA（免疫球蛋白M，氧化氮）	6小时	快速、简单
免疫印迹	6小时	昂贵的
分子生物学
MG	5-7天	昂贵且 劳动密集
聚合酶链反应	3小时	昂贵的

带状疱疹病毒的诊断方法

诊断方法	实验室 技术
间接
选择	组织培养、鸡胚、实验动物、与允许细胞或辅助病毒共培养
分离株的鉴定	中和反应、RSC、IF、PIEF、分离物沉淀反应、凝集反应、IF
直接的
细胞学	涂片：彩色免疫荧光
组织学	细胞病理形态学
结构	胚胎显微镜、免疫电子显微镜
抗原测定	如果，PIEF，RIM，IFA
确定局部抗体的产生	免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A：ELISA、RIA
分子生物学方法	分子杂交，PCR

带状疱疹病毒感染的实验室诊断

诊断 问题	方法	预期结果
急性原发性感染	1	2小时内检测
	2	抗体水平正在缓慢上升
	3	感染后3天出现
急性 再激活 感染	1	2小时后检测出UUU
	2	抗体水平正在缓慢上升
	4	皮疹出现后 4 天出现

1. 测定液体中的 VEGF 囊泡；
2. 血清学：CSC、ELISA，旨在检测
3. 血清学：旨在检测 IgM 的 ELISA；
4. 血清学：ELISA旨在检测IgA，IgM。

指示对带状疱疹病毒感染的免疫反应的方法

方法	方法
检测到第二份血清中抗体滴度增加	RSK、RTGA、RPGA、IF中和反应、RIM、ELISA
检测第一份血清样本中的 Ig G、Ig A 类特异性抗体	ELISA、IF、RIM、乳胶凝集

疱疹病毒感染患者血清学检测结果解读（ELISA）

感染/标记物名称	感染的平均阈值
	分析结果	解释
细胞肿大抗 CMV IgG（1-20 U/ml） 抗CMV IgM（100-300%）	阳性 1-6 阳性 6-10 阳性 >10 阴性 阳性 100-300 阴性 <90 可疑 90-100	缓解期 病情加重 期 病情急性期 无感染（疾病） 病情急性期 2-3 周后重复分析
单纯疱疹1、2血清型 抗HSV 1/2总量（100-900%）	正值 100-400 正值 400-800 正值 >800 负值 <100	缓解期 病情加重期 病情急性期 无感染（疾病）

该表列出了疱疹病毒感染的主要实验室诊断方法，以及在分离 HSV 时检查的推荐生物材料，同时考虑到疱疹病变的定位。

通过感染敏感细胞培养物可靠地分离单纯疱疹病毒和巨细胞病毒。例如，在对26例复发期患者进行病毒学检查时，23例（88.4%）在敏感的Vero细胞培养物中分离出了HSV。感染的培养物表现出HSV典型的细胞病变特征——多核巨细胞的形成或圆形增大细胞聚集形成簇状。在52.1%的病例中，感染后16-24小时内即可检测到病毒的细胞病变灶。感染培养物孵育48-72小时后，导致细胞特异性破坏的物质比例增至87%。仅13%的病例在感染后96小时或更长时间或多次传代后检测到阳性结果。

全身性疱疹感染的实验室诊断方法

检测（分离）疱疹病毒、其颗粒及其成分的主要方法	辅助方法旨在检测生物体液中的疱疹病毒抗体、检测血清中的酶促变化
在敏感细胞和动物培养物中分离疱疹病毒 直接和免疫电子显微镜 免疫过氧化物酶法的直接和间接变体荧光抗体法的直接和间接变体 固相酶免疫测定法的 变体分子（DNA-DNA）杂交法的变体 聚合酶链式反应 乳胶凝集反应	中和试验 补体结合试验 乳胶 凝集试验 间接荧光抗体法 间接免疫过氧化物酶法 固相酶 免疫测定法变体 免疫印迹法 放射状补体结合法 测定丙氨酸和天冬氨酸氨基转移酶水平

血清学方法用于诊断传染性单核细胞增多症（EBV 引起的感染）。保罗-布内尔 (Paul-Bunnell) 反应用于检测马红细胞，单次血清检测中诊断滴度达到 1:28 或更高，或双份血清检测中抗体增加 4 倍。霍夫-鲍尔 (Hoff-Bauer) 反应用于检测 4% 甲醛化马红细胞悬浮液。2 分钟后即可得出结果；对于传染性单核细胞增多症，该反应具有高度特异性。

目前正在开发一种用于诊断传染性单核细胞增多症的酶联免疫吸附测定 (EIA) 方法。该方法通过将患者血清与感染 EBV 的淋巴母细胞孵育，然后用荧光抗体处理，来测定血清中的 IgG 和 IgM 抗体。在疾病急性期，病毒衣壳抗原抗体滴度可达 1:160 及以上。

使用多种进口商业检测系统，ELISA 可以检测：EBV 包膜抗体、EBV 早期抗原抗体、EBV 早期抗原总抗体（在疾病急性期可检测到细胞核和细胞质）、EBV 早期抗原有限抗体（在疾病急性期可检测到细胞核和细胞质）、EBV 早期抗原有限抗体（在疾病高峰期仅在细胞质中检测到）以及 EBV 核抗原抗体。使用这些检测系统可以对多种 EBV 相关疾病进行鉴别诊断。

在 ELISA 检测呈阳性并显示存在 EBV 抗体后，将进行确认性免疫印迹反应，以确定是否存在针对各个 EBV 标记蛋白（p 蛋白）的抗体：p23、p54、p72（该蛋白的存在表明存在 EBV 复制的可能性）、p 138。上述实验室方法也用于监测治疗效果。

病毒学方法的敏感性为85-100%，特异性为100%，检测时间为2-5天。实际工作中常用的是直接免疫荧光法（DIF），该方法使用针对HSV-1和HSV-2的多克隆或单克隆抗体。DIF方法在常规临床实验室中易于重复，成本低廉，敏感性高于80%，特异性为90-95%。免疫荧光显微镜检查可显示尿道、宫颈管、宫颈和直肠涂片中是否存在细胞质内含物、形态特征以及感染细胞的百分比。

PIF 方法可以了解细胞的形态特性以及 HSV 抗原定位的变化。除了疱疹病毒损伤细胞的直接迹象（检测特异性发光）外，根据 PIF 数据，还可以发现疱疹感染的间接迹象：

• 核物质聚集，核膜脱离；
• 当细胞核仅剩下一个核膜时，就会出现所谓的“空洞”核；
• 核内包含物——考德里小体的存在。

在进行PIF检查时，医生不仅可以定性评估感染细胞的状态，还可以定量评估，我们利用这一评估来评估阿昔洛韦(AC)抗病毒疗法的有效性。因此，我们采用PIF方法对80例单纯性生殖器疱疹(GH)患者进行了动态检查。结果表明，在接受阿昔洛韦治疗前，88%的患者涂片中感染细胞比例较高（50-75%甚至更高）；而接受一个疗程的阿昔洛韦治疗后，44%的患者涂片中检测到健康细胞，31%的患者检测到单个感染细胞，25%的患者感染细胞比例高达10%。

接受阿昔洛韦治疗的生殖器疱疹患者涂片中感染细胞的含量（PIF反应）

患病期间	涂片中的百分比含量
	受感染的细胞					正常 细胞
	超过 75%	50-75%	40-50%	10%	视野中的单个细胞
复发（治疗前）	25%	63%	12%
	(20)	(50)	（10）
缓解（治疗后）				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

多年来，PIF和斑点杂交法的应用已证实，其研究结果几乎100%的病例吻合。需要注意的是，为了提高疱疹诊断的可靠性，尤其是在亚临床和低表现型疱疹病例中，建议在工作中使用2-3种实验室诊断方法，尤其是在检查孕妇、有不良产科史的女性以及妇科诊断不明的患者时。

因此，在对泌尿生殖道病毒和细菌感染进行 PCR 诊断时，必须结合既往病史、有无特定临床症状来评估阳性结果。如果使用 PCR 检测出衣原体，则感染的可能性很高，可以据此解决治疗问题。如果检测出支原体（脲原体），即机会性微生物，则需要进行额外的培养研究以确诊，即将患者的样本接种到敏感的细胞培养物中。只有在培养分析中获得阳性结果时，才能谈论对支原体病诊断的实验室确诊。如有必要，可以使用相同的方法确定分离出的支原体对常用药物（抗生素、氟喹诺酮类药物等）的敏感性。

疱疹病毒科的几种病毒可能同时感染。我们经常检测到同一患者同时感染 HSV-1、HSV-2 和 CMV 病毒。临床和实验室检查显示继发性免疫缺陷综合征 (IDS) 的患者（肿瘤血液病、肿瘤科、HIV 感染者）感染多种疱疹病毒的几率显著升高。因此，已有研究表明，HIV 感染导致的临床和免疫疾病进展，伴随分子杂交方法检测出的疱疹病毒数量增加。在这种情况下，同时检测出 HSV-1、CMV 和 HHV-6 型 DNA 的复杂情况，可以视为最具预后意义的指标。

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]