土拉菌病的病原体

土拉菌病是动物（啮齿类动物）的主要疾病，在人类中则是一种急性传染病，临床表现多样，恢复缓慢。土拉菌病的病原体——土拉弗朗西斯菌，由G. McCoy和S. Chapin于1912年在图莱里湖（加利福尼亚州）附近的地松鼠中发现，E. Francis对其进行了详细研究，并以他的名字命名了该属。

这些菌株体型极小，大小为0.2-0.7微米，呈球状或椭圆状多形杆状，使用特殊染色方法时常呈现双极染色；它们不运动，革兰氏阴性，不形成孢子；过氧化氢酶阴性，产生H2S，为严格需氧菌，最适生长温度为37°C，pH值为6.7-7.2。强毒株有荚膜，在发酵某些碳水化合物（葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、果糖、糊精）时产酸但不产气，不同菌株的发酵程度不同，DNA中G+C的含量为33-36摩尔%。土拉弗朗西斯菌在普通培养基中不能生长。G. McCoy和Sh. Chapin使用凝固型卵黄培养基。土拉菌杆菌在其上生长，形成类似露珠的纤细小菌落，随后培养物会呈现出一层纤细的鲨鱼皮涂层，并带有微弱的粘液稠度。E. Francis 建议使用营养琼脂来培养土拉菌杆菌，其中含有 0.05-0.1% 的胱氨酸、1% 的葡萄糖和 5-10% 的血液。在这种培养基中，菌落生长得更加茂盛和粗糙：菌落呈圆形，表面光滑，呈乳白色，湿润，具有粘液稠度，周围环绕着特征性的绿色光晕。菌落生长缓慢，在第 3-5 天达到最大尺寸（1-4 毫米）。土拉菌杆菌在鸡胚的卵黄囊中繁殖良好，并于第 3-4 天导致鸡胚死亡。

土拉弗朗西斯菌的生长需要以下氨基酸：精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、苏氨酸、组氨酸、缬氨酸、胱氨酸，某些亚种还需要丝氨酸、酪氨酸、天冬氨酸；此外，土拉弗朗西斯菌的生长还需要泛酸、硫胺素和Mg2+离子。考虑到这些特性，可以使用合成培养基来培养土拉弗朗西斯菌。

弗朗西斯菌属（Francisella）属于变形菌门（Proteobacteria）、γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）。该属还包括新凶手弗朗西斯菌（F. novicida），其对人类的致病性尚不明确。

土拉菌病的病原体是一种细胞内寄生虫。其毒性源于其荚膜抑制吞噬作用、神经氨酸酶促进粘附、内毒素、细胞壁的致敏性，以及在吞噬细胞中繁殖并抑制其杀伤作用的能力。其毒性机制尚未阐明。此外，在土拉菌中发现了能够与IgG免疫球蛋白Fc片段相互作用的受体。这种结合会破坏补体系统和巨噬细胞的活性。

S型（强毒力）的土拉弗朗西斯菌有两种抗原——O抗原和Vi抗原（荚膜抗原）。O抗原与布鲁氏菌的抗原相关。S型→SR型→R型的分离会导致荚膜、毒力和免疫原性的丧失。土拉弗朗西斯菌种分为三个地理亚种（亚种）：

• 全北极地区（对家兔致病性低，不发酵甘油，也不含有北半球国家发现的瓜氨酸脲酶）；
• 中亚（对兔子致病性低，含有瓜氨酸脲酶并能发酵甘油）；
• 新北菌（美洲），对兔子的致病性更强，可发酵甘油，含有瓜氨酸脲酶。

此外，美洲和中亚亚种的菌株具有磷酸酶活性，而全北极亚种的菌株则没有这种活性。

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土拉菌病病原体的耐药性

土拉弗朗西斯菌在外部环境中相当稳定，尤其是在病理物质中。在饲料、谷物中，以及被病鼠粪便污染的环境中，其存活时间可达4个月；在水中可达3个月；在冰中可达1个月以上。土拉弗朗西斯菌对阳光直射（30分钟内死亡）、高温（60°C下10分钟内死亡）敏感，在3%来苏尔溶液、50%酒精、福尔马林和其他消毒剂的作用下，5-10分钟内即可死亡。

土拉菌病的流行病学

土拉菌病在自然界的主要宿主是啮齿动物，其中在自然条件下观察到动物流行病。人类仅通过动物感染；病原体不会在人与人之间传播。该病原体已在82种啮齿动物和兔形目动物中发现，最常见于4个科的代表动物：鼠科（Muridae）、野兔科（Leporidae）、松鼠科（Sciuridae）和跳鼠科（Dipodidae）。在俄罗斯，主要的带菌者是鼠科啮齿动物：水鼠、普通田鼠、家鼠和麝鼠。

根据对土拉菌病的敏感性，动物可分为四类：

• 第一组 - 最易感动物（田鼠、水鼠、家鼠、白鼠、豚鼠等）。最低致死剂量为一个微生物细胞；
• 第二类——敏感性较低（灰鼠、地鼠等）。最低致死剂量为10亿个微生物细胞，但一个微生物细胞就足以感染其中一些；
• 第三组（捕食动物——猫、狐狸、雪貂）。对高感染剂量有抵抗力，疾病进展时无明显症状；
• 第 4 组 - 对土拉菌病免疫（有蹄类动物、冷血动物、鸟类）。

对于人类来说，最低感染剂量是一个微生物细胞。人类可以通过各种可能的途径感染：直接或间接接触患病的啮齿动物、其尸体或被啮齿动物感染的物品；食物途径（食用被啮齿动物感染的食物和水）；空气中的尘埃；以及传播途径。土拉菌病菌已在77种吸血节肢动物中被确认感染。尤为重要的是硬蜱，病原体在其体内终生存在，甚至通过卵巢传播给后代。这些情况都有助于疾病在自然界的传播。人类感染蜱虫并非通过叮咬，而是病原体随蜱虫排泄物进入皮肤。

在俄罗斯，土拉菌病自然疫源地主要有 7 种景观类型：沼泽、草甸田野、草原、森林、山麓溪流、苔原和沙漠。

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土拉菌病的症状

土拉菌病的病原体通过外层覆盖物（受损和完整的皮肤和黏膜）侵入人体。侵入部位常形成溃疡。细菌通过淋巴管进入局部淋巴结并在其中自由繁殖；炎症过程导致腹股沟淋巴结炎的形成。病原体由此进入血液，引起菌血症的全身化，累及各个器官和组织，细菌增殖导致肉芽肿和坏死性溃疡的形成。菌血症和全身化与机体的过敏性结构改变有关。土拉菌病的潜伏期为2至8天。该病起病急：出现发热、头痛、肌肉疼痛、面部充血。土拉菌病的进一步发展取决于其入侵部位，根据入侵部位，土拉菌病可分为以下临床类型：溃疡腺型（腺性）、眼腺型、咽峡腺型、腹部型和肺部型。土拉菌病的死亡率不超过1-2%。

感染后免疫力强，持久，在大多数情况下持续终生，具有细胞特性，主要由T淋巴细胞和巨噬细胞引起，抗体也参与其中。具有免疫力的个体的吞噬功能是完全的。

土拉菌病的实验室诊断

所有微生物学方法均用于诊断土拉菌病。研究在安全的实验室进行。研究材料——血液、腹股沟淋巴结穿刺物、溃疡刮片、结膜分泌物、咽部斑块、痰液等——将根据疾病的临床表现确定。此外，研究还可以采集水和食物。在土拉菌病自然疫源地，有计划地开展系统性研究，以从啮齿动物中分离土拉菌病病原体。

用细菌学方法诊断人类土拉菌病很少能得到阳性结果。纯培养物通常在易感实验动物体内积累后分离。白鼠和豚鼠用于生物测定。小鼠皮下感染，豚鼠腹腔感染；动物在第3-6天死亡，有时在霜冻后死亡。感染动物被饲养在特殊条件下（如诊断鼠疫时），并观察6-14天。凝胶实验动物在7-15天内不会死亡，它们在第15-20天被宰杀，尸体进行尸检。土拉菌病的病理和解剖学变化表现为伴有坏死的增殖过程。纯培养物可在卵黄培养基、葡萄糖-半胱氨酸血凝集物等培养基中从内脏器官中分离。鉴定依据是病原体的形态和染色特性、在MPA培养基上不生长以及与同源血清的凝集。对白鼠和豚鼠具有致病性。纯培养物可通过感染12天鸡胚和卵黄囊来分离。为了从水中分离病原体的纯培养物，需要将其离心或通过细菌过滤器过滤，然后用沉淀物感染实验动物。在研究食品时，需要用MP B清洗，然后离心，然后用沉淀物感染实验动物。

在进行细菌学检查的同时，需对待检材料进行涂片印迹分析，并根据罗曼诺夫斯基-吉姆萨染色法进行染色。在器官涂片中，可检测到细小的球状和杆状细菌，这些细菌位于细胞内，成簇存在，形成一层薄薄的荚膜。

为了进行诊断，使用详细的凝集反应、RPGA 和 RIF。

过敏测试用于土拉菌病的早期诊断（发病后第五天起）。土拉菌素有两种类型，因此给药方法也有两种：皮肤给药和皮内给药。由于两种土拉菌素的过敏原浓度不同，因此不能将皮肤给药的土拉菌素用于皮内给药，反之亦然。过敏反应结果会在24、36、48小时后动态显示。直径至少为5毫米的浸润物被认为是阳性结果。对于接种过疫苗或曾患过土拉菌病的人来说，过敏测试结果会在数年内保持阳性（回忆反应）。

土拉菌病的具体预防

为了进行具体的预防，可以使用由苏联军医B. Ya. Elbert和NA Gaisky于1930年从Me 15毒株中获得的土拉菌病疫苗。该疫苗在感染欧洲亚种和全北极亚种后可提供长达5-6年的强效免疫力，并且对美洲亚种的土拉菌病也有效。疫苗接种应根据流行病学指征以及高危人群的情况进行。可以同时接种土拉菌病和布鲁氏菌病疫苗、土拉菌病和鼠疫疫苗，以及土拉菌病和其他一些感染疫苗。

土拉菌病的非特异性预防与其他人畜共患病相同，主要目的是控制啮齿动物。