抗生素药敏试验：准备、解密、做多少
最近審查：05.07.2025
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如今，抗生素敏感性测试越来越普及。人体微生物群落种类繁多，以各种生物群落中的大量微生物为代表。
制药公司开发了大量抗菌药物，即抗生素，它们有助于维持微生物群落的正常比例和数量。随着抗生素时代的到来，许多曾被认为是致命的疾病得以治愈。但微生物也努力生存，逐渐适应抗菌药物的作用。随着时间的推移，许多微生物对多种药物产生了耐药性，并将其固定在基因型中，并开始代代相传。因此，新产生的微生物最初对某些药物不敏感，使用它们可能无效。药剂师正在开发越来越多的新产品，添加新的活性成分，改变基本配方。但渐渐地，对它们的耐药性也随之产生。
微生物群落对许多药物，甚至其类似物耐药性增强的原因，往往隐藏在抗生素的不当使用和不受控制的滥用之中。医生会针对各种细菌性疾病开具抗生素及其组合。同时，医生没有对抗生素的疗效进行初步评估，也没有选择最佳剂量，而这对于治疗和预防进一步产生耐药性都至关重要。许多人甚至错误地为病毒性疾病开具了抗生素疗法，但这种疗法是无效的，因为抗生素对病毒不起作用。
治疗方案通常在没有进行初步敏感性测试的情况下就开具，也没有针对每种特定疾病和生物群落选择活性药物和所需剂量。由于抗生素是“盲目”开具的，因此经常出现抗生素对致病微生物（这些微生物的数量需要减少）没有表现出任何活性的情况。相反，它们会影响其他菌群，导致菌群失调，这也是一种相当危险的病症，并可能导致严重后果。尤其危险的是，抗生素会破坏正常的菌群，而正常的菌群旨在保护身体并维持其正常功能。此外，还存在开具过量或过少药物的情况。
患者对治疗也缺乏责任感。通常，疾病症状消失后便会停止治疗。同时，许多人不愿完成整个疗程。这是导致细菌产生耐药性的因素之一。完整的疗程旨在彻底杀死致病菌群。如果未完成疗程，则无法彻底杀死。存活下来的微生物会发生突变，发展出抵御这种药物的机制，并将这种药物传递给下一代。危险的是，耐药性不仅针对特定药物，还可能针对所有药物。
因此，当今合理治疗和预防耐药性的最有效手段之一是初步确定对所处方药物的敏感性并选择其最佳剂量。
程序的適應症 抗生素敏感性测试
通常，所有需要抗菌治疗的情况都应进行此类分析。根据抗生素治疗的基本规律，任何抗生素只有在初步评估菌群对该药物的敏感性，并在实验室条件下确定活性物质的最佳浓度后，才能开具处方。实际上，由于各种原因和情况，在开始治疗前不会进行此类研究，医生被迫“随机”选择药物。
如今，只有在医生严重怀疑所开药物是否有效、药物长期无效以及在有限时间内重复使用同一种药物的情况下，才会进行药物敏感性测试。药物敏感性测试通常用于性传播疾病的治疗。许多专家在出现副作用、过敏反应以及需要更换药物时，也会进行药物敏感性分析。
这种分析也常用于选择手术、腹腔镜手术和器官摘除术后恢复期的抗菌药物。在外科和化脓性手术科室，这样的研究是必要的，因为耐药性在这里发展得相当快。此外，还会出现超耐药的“医院获得性”细菌。许多私人诊所在开药时会完全负责——只有在检查过药敏试验后才开。在许多情况下，国家机构的预算根本无法为每位需要抗菌治疗的患者进行此类研究。
製備
研究准备无需任何特殊措施，与任何测试一样。研究前几天，请勿饮酒。采集样本当天早上，通常情况下，请勿进食或饮水。但一切取决于分析类型。根据疾病的不同，研究样本可能有所不同。
如果是咽喉和呼吸道疾病，需要采集咽喉和鼻拭子。对于性病科、妇科和泌尿科，需要采集生殖器拭子和血液进行分析。对于肾脏疾病，通常需要检测尿液。如果是胃肠道疾病和某些传染病，需要检测粪便和呕吐物。有时，还可以检测乳汁、鼻涕、眼分泌物、唾液和痰液。如果病情严重且怀疑存在感染，甚至需要检测脑脊液。检测范围非常广泛。
采集材料的特征取决于其生物学属性。因此，尿液和粪便在早晨收集于干净的容器或专门用于生物材料的容器中。母乳在哺乳前收集。取中段乳汁进行检查。涂片用特制拭子采集，拭子沿黏膜移动，然后放入装有预处理培养基的试管中。血液从手指或静脉采集到试管中。采集尿道或阴道涂片时，建议几天内避免性交。
收集用于研究的生物材料时，首先必须确保采集的正确性和无菌性。但在大多数情况下，这是医务人员的职责，患者无需担心。妇科医生和泌尿科医生最常参与此类研究，其次是耳鼻喉科医生，他们负责治疗鼻咽部、咽喉部和上呼吸道疾病。
誰聯繫？
技術 抗生素敏感性测试
采集的生物材料在无菌条件下送至实验室进行进一步研究。首先，将其初步接种于通用培养基中。部分材料还会被取样进行显微镜检查。准备显微镜涂片并进行研究，借助该涂片可以大致了解样本中存在的微生物种类。这有助于选择最佳环境进行进一步研究和鉴定微生物。此外，还可以通过显微镜观察炎症和肿瘤病变的征兆。
经过几天的时间，微生物菌落会在培养皿中生长。然后，取出几个菌落，转移到选择性培养基中，这样就可以确定微生物的大致种类。它们在恒温箱中孵育数天，然后开始鉴定（确定微生物的类型）。鉴定是通过特殊的生化和基因检测（即鉴定器）进行的。此外，还可以进行免疫学研究。
分离出主要病原体后，需要评估其对抗生素的敏感性。评估方法有多种。最常用的方法是连续稀释法，又称纸片扩散法。微生物学参考书、指南和实验室标准中对这些方法进行了详细描述。
纸片扩散法的本质是将已鉴定的微生物接种于营养培养基上，并在其上放置浸有抗生素的特殊纸片。将接种物在恒温箱中培养数天，然后测量结果。评估每种抗生素对细菌生长的抑制程度。如果细菌对抗生素敏感，则会在纸片周围形成一个“裂解区”，细菌在该区内无法繁殖。它们的生长缓慢或完全停止。生长抑制区的直径可用于确定微生物对抗生素的敏感性程度，并制定进一步的建议。
连续稀释法是最准确的。该方法将微生物接种于液体培养基中，并加入按十进制稀释系统稀释的抗生素。之后，将试管放入恒温箱中培养数天。抗生素敏感性是通过在添加抗生素的营养液中细菌的生长程度来确定的。记录微生物仍能生长的最低浓度。这就是药物的最低剂量（需要从微生物单位重新计算为活性物质的单位）。
这些是构成任何研究基础的标准微生物学方法。它们意味着所有操作均需手动完成。如今，许多实验室配备了可自动执行所有这些程序的专用设备。使用这些设备的专业人员只需具备操作设备的能力，并遵守安全和无菌规定即可。
必须考虑到实验室条件下和生物体内的敏感性指标差异很大。因此，医生开出的剂量可能会高于研究期间确定的剂量。这是因为人体并不具备细菌生长的最佳条件。实验室会创造“理想条件”。部分药物可以通过唾液和胃液的作用被中和。部分药物则会在血液中被免疫系统产生的抗体和抗毒素中和。
尿液抗生素敏感性试验
首先，收集生物材料。为此，需要收集晨尿中段并将其送至实验室。分析前几天务必保持无菌状态，并且不要服用抗生素，否则可能会得到假阴性结果。之后，进行标准接种，其本质是分离病原体的纯培养物，并选择对其具有最佳杀菌效果的抗生素。确定所需的抗生素浓度。
当怀疑泌尿生殖系统存在感染和炎症，并伴有免疫缺陷和代谢紊乱时，通常会进行尿液分析。尿液通常为无菌液体。尿液分析的持续时间为1-10天，取决于微生物的生长速度。
培养和抗生素敏感性测试
这项研究涉及将病原微生物分离并培养成纯培养物。有时可能存在几种这样的微生物（混合感染）。一些微生物能够形成生物膜，即一种“微生物群落”。生物膜的存活率远高于单个微生物或微生物群落。此外，并非所有抗生素都能影响并穿透生物膜。
为了确定病原体，并将其分离成纯培养物，需要进行播种。在研究过程中，需要在不同的培养基中进行多次播种。然后分离纯培养物，确定其生物学属性，并确定其对抗菌药物的敏感性。最后，选择最佳浓度。
任何生物材料均可用于研究，具体取决于疾病类型和感染过程的部位。研究持续时间取决于微生物的生长速度。
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粪便敏感性测试
在各种胃肠道疾病中，如疑似感染、细菌中毒或食物中毒，都需要进行粪便检查。该研究的目的是分离病原体，并筛选出针对该病原体的最佳高效抗菌药物。此类研究的重要性在于，它能够筛选出一种只作用于病原体，而不会影响正常菌群的药物。
第一步也是最重要的一步是收集粪便。应在早晨将粪便收集到专用无菌容器中。粪便保存时间不得超过1-2小时。月经期的女性应将分析推迟到月经结束后进行，因为结果的准确性会受到影响。收集的粪便将送至实验室进行检测。分析采用标准的微生物学技术，包括播种和分离纯培养物。此外，还会进行抗生素谱分析。根据分析结果，制定建议并确定进一步的研究方案。
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菌群失调敏感性分析
研究材料是排便后立即采集的粪便。胃肠道的正常菌群由正常菌群和多种致病菌群组成。它们的种类、数量和比例都严格控制在允许的范围内。如果该比例被扰乱，就会发生菌群失调。它可以通过多种方式表现出来。如果致病菌群的数量急剧增加，就可能引发传染病。如果任何微生物的数量急剧减少，则自由空间会被其他非胃肠道典型或致病的菌群占据。通常，自由空间会被真菌占据，从而引发各种真菌感染和念珠菌病。
为了确定肠道菌群的定量和定性组成，需要进行粪便菌群分析以检测菌群失调。通常，肠道内所有微生物被分为三类：致病性、机会性和非致病性。因此，分析包含三个部分。每类微生物对食物来源和能量的需求各不相同。每类微生物都需要不同的培养基和选择性添加剂。
首先进行显微镜检查和初步接种。接种后，选择形态特征与各组代表相似的最大的菌落。将其转移到选择性培养基中。微生物生长后，立即进行鉴定，并进行抗生素敏感性测试。采用标准的微生物学方法。
除常规检查外，对一组致病微生物的检测还包括伤寒、副伤寒和痢疾杆菌的检测。此外，还会确定一个人是否是这些微生物的携带者。菌群失调的综合检查还包括对双歧杆菌和乳酸杆菌群的检测。该检查大约需要一周时间，具体取决于微生物的生长速度。
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噬菌体敏感性测试
在肠道感染的情况下，噬菌体通常用于治疗，而不是抗生素。噬菌体是一种仅对抗生素敏感的细菌病毒。它们会找到与其互补的细菌，侵入细菌并逐渐破坏细菌细胞。最终，感染过程停止。但并非所有细菌都对噬菌体敏感。为了检查特定噬菌体是否对特定微生物群落的代表菌群表现出活性，必须进行分析。
研究材料为粪便。分析必须在一小时内送达实验室，否则将无法进行。分析需要重复进行多次。初始方法与确定抗生素敏感性的方法类似。首先，对样本进行初步显微镜检查，然后在通用培养基上进行初步接种。之后，在选择性培养基上分离纯培养物。
主要工作是在纯培养物上进行的。它们用不同类型的噬菌体进行处理。如果菌落溶解（裂解），则表明噬菌体活性高。如果裂解不完全，则表明噬菌体功能中等。如果没有裂解，则可以说对噬菌体具有抗性。
噬菌体疗法的优点在于噬菌体不会影响人体，也不会引起副作用。它们会附着于特定类型的细菌并将其裂解。缺点在于，它们非常具有特异性，具有选择性作用，并且并非总是能够附着在细菌上。
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痰液分析抗生素敏感性
该分析是对下呼吸道分泌物进行的研究。其目的是确定引起疾病的微生物种类。此外，还会进行抗生素谱分析。在此过程中，可以确定病原体对抗生素的敏感性，并选择最佳浓度。该分析用于治疗呼吸道疾病。
痰液及肺和支气管内其他内容物的检查对于选择治疗方案和鉴别各种诊断至关重要，可用于确诊或排除结核病。
首先，需要获取生物样本。可以通过咳嗽、咳痰或在支气管镜检查时从气管中取出。有一些特殊的气雾剂可以促进咳痰。取痰前，应先用水漱口，以减少口腔细菌污染程度。首先，建议深呼吸3次并进行有痰的咳嗽。也可以通过气管抽吸来获取痰液。在这种情况下，需要将一根特殊的导管插入气管。在支气管镜检查过程中，需要将支气管镜插入支气管腔。在这种情况下，需要用麻醉剂润滑粘膜。
随后，材料被送往实验室进行检测。进行标准的接种和显微镜检查。然后分离纯培养物并进行进一步的操作。进行抗生素图谱分析，以确定细菌的敏感性范围并选择最佳剂量。
如果怀疑患有结核病，则需要连续三天进行晨痰检查。结核病检测通常需要3-4周才能出结果。因为结核病的病原体结核分枝杆菌生长非常缓慢。
通常情况下，应该检测呼吸道正常菌群的代表。还必须考虑到，当免疫力下降时，正常菌群的指标可能会有所不同。
精子抗生素敏感性分析
这是对精液中的精子进行细菌学研究，随后选择敏感抗生素及其浓度。它最常用于治疗不育症和其他男性生殖系统疾病。如果疾病伴有感染过程，则需要进行细菌学研究。在大多数情况下，男性不育的主要原因是感染。通常，首先进行精液检查。根据结果，可以确定精子的受精能力。如果在分析中发现大量白细胞，则可以推测存在炎症。在这种情况下，通常会立即进行微生物学分析，因为炎症几乎总是伴有感染。根据获得的结果，选择适当的治疗方法。该检查通常由男科医生开具。
前列腺炎和性病也是进行分析的原因。如果伴侣被检测出患有性病，也会被要求进行分析。
正确分析的基础首先是正确采集生物样本。样本应采集于特制的宽口容器中。储存温度应与人体温度一致。在这种情况下，样本的保存时间不得超过一小时。冷冻保存的样本保存时间不得超过一天。服用抗生素期间进行细菌培养不适宜，这会改变临床表现。通常，在开始抗生素治疗前进行细菌培养。或者，在分析前2-3天停药。
然后将其接种到营养培养基中。在恒温箱中培养1-2天。之后，分离纯培养物，进行鉴定，测定药敏试验，以及每个菌落的类型和生长速度。如果检测到病原微生物，则确定其对抗生素的敏感性。分析平均需要5-7天。
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麸质敏感性测试
有许多测试可用于确定对各种物质或病原体的免疫敏感性。过去，主要方法是基于抗体和抗原的凝集反应进行测试。如今，这些测试的使用越来越少，因为它们的灵敏度远低于许多现代方法，例如麸质测试。在实践中，他们通常采用唾液测试进行麸质检测和粪便分析。
麸质敏感性测试用于诊断各种肠道疾病。它基于免疫系统的反应。如果粪便中含有麸质，则会出现或不出现反应。这被认为是假阳性或假阴性结果。阳性结果表明患者易患结肠炎，并且很有可能发展为结肠炎。阳性结果也可用于确诊乳糜泻。
也可以使用唾液作为生物材料进行麸质测试。可以测量麦胶蛋白抗体的含量。阳性结果表示对麸质敏感。这可能表明患有糖尿病的可能性很高。如果两项测试都呈阳性，则可以确诊糖尿病或乳糜泻。
衣原体抗生素敏感性测试
在治疗泌尿生殖道感染性和炎症性疾病时，如果怀疑感染衣原体，则需要进行分析。研究材料为女性阴道黏膜刮片，男性尿道涂片。采集工作在操作室内使用一次性设备进行。保持无菌至关重要。采集材料前，应在研究开始前1-2天内避免性生活。如果女性正在月经，则在月经结束后3天采集材料。
样本送至实验室。全面分析包括涂片的初步显微镜检查。这使我们能够根据形态特征直观地确定微生物群落，并正确选择培养基。黏液、脓液和上皮颗粒的含量可能直接或间接地提示炎症过程或细胞恶性变性的进展。
然后进行初次接种。培养物在恒温箱中培养数日，并根据培养特征进行鉴定。之后，将培养物转移至用于培养衣原体的选择性营养培养基中。通过生化试验鉴定所得菌落。之后，使用标准方法确定其对抗生素的敏感性。选择最敏感的抗生素及其浓度。培养衣原体需要专门为此类微生物研发的特殊培养基，其中含有培养衣原体所需的所有必需物质和生长因子。
也可以使用生物学方法进行研究。为此，需要用大鼠感染病原体。一些实验室会使用专门培养的组织培养物来代替大鼠。这是因为衣原体是细胞内寄生虫，需要特殊的培养条件。然后，使用PCR方法检测微生物。为了确定敏感性，将培养物移植到衣原体选择性培养基中，几天后记录结果。通过细胞内感染过程的抑制情况来判断其抗性或敏感性。
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做抗生素敏感性测试需要多长时间？
平均而言，分析在5-7天内完成。有些分析需要更长时间。例如，诊断结核病时，需要等待3周到1个月才能得到结果。一切都取决于微生物的生长速度。实验室工作人员经常需要处理患者要求加快分析的病例。他们甚至会为加急提供“额外费用”。然而，您需要明白，在这种情况下，实验室工作人员的操作与否无关，只取决于微生物的生长速度。每种微生物都有其自身严格规定的生长速度。
正常的表現
对于所有分析，并没有绝对通用的标准值。首先，这些值可能因每个生物群落而异。其次，每种微生物的标准值都是独一无二的。也就是说，同一种微生物的标准值，比如，在咽喉和肠道中是不同的。因此，如果葡萄球菌作为正常微生物群落的代表在咽喉中占主导地位，那么大肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌在肠道中占主导地位。同一种微生物在不同生物群落中的值也可能存在显著差异。例如，念珠菌通常可能在泌尿生殖道微生物群落中存在一定量。它们通常不会出现在口腔中。口腔中存在念珠菌可能表明它们是从其自然栖息地人工引入的。
尿液、血液和脑脊液是生物环境，通常应为无菌，即不应含有任何微生物。这些液体中存在微生物表明存在强烈的炎症和感染过程，也提示存在发生菌血症和败血症的风险。
一般来说，有一个大致的分类。微生物学中的测量单位是CFU/ml，即1毫升生物体液中的菌落形成单位（CFU）数量。污染程度由CFU数量决定，范围从10 1到10 9。因此，10 1是微生物的最低数量，10 9是感染的严重程度。同时，高达10 3的范围被认为是正常的，所有高于此数量的指标都表明细菌的病理性繁殖。
就抗生素敏感性而言，所有微生物都分为耐药性、中度敏感和敏感。这一结果通常以定性特征表示，即MID（抗生素的最低抑菌剂量），该剂量仍能抑制微生物的生长。对于每个人以及每种微生物而言，这些指标都是严格个体化的。
分析設備
在进行细菌学研究时，尤其是在确定抗生素敏感性时，一台设备是不够的。一套完整、全面的细菌学实验室设备至关重要。必须仔细规划和选择与研究每个阶段相对应的设备。在收集生物材料阶段，需要无菌器械、盒子、容器、储存室以及用于将材料运送到实验室的运输设备。
在实验室中，首先需要一台高质量的显微镜进行涂片显微镜检查。如今，市面上有大量性能各异的显微镜，从传统的光学显微镜到相衬显微镜和原子力显微镜，应有尽有。现代设备能够在三维空间中扫描图像，并以高倍率进行高精度检查。
在微生物接种和培养阶段，可能需要高压灭菌器、干热箱、干燥器、蒸汽浴和离心机。此外，还需要一个恒温器，用于生物材料的主要培养。
在微生物鉴定和进行抗生素图谱的阶段，可能需要使用显微操作器、质谱仪、分光光度计、比色计对培养物的生化特性进行各种计算和评估。
此外，现代实验室可以配备高科技设备，执行上述所有主要研究阶段，直至自动计算结果。例如，这类设备包括基于飞行时间质谱仪的细菌学实验室综合装置。这一系列设备可以将实验室的整个区域划分为三个区域。第一个区域是脏污区，用于接收和记录测试结果。第二个区域是工作区，主要微生物学研究在此进行。第三个区域是灭菌和高压灭菌区，用于制备和处理工作材料。
该型号可在各种温度和条件下进行培养。内置血液和其他生物样本分析仪，可生成高精度可靠的结果。套件包含电子秤、双蒸馏器、离心机、高压灭菌器和灭菌柜、自动中火蒸煮器、内置搅拌器的水浴锅、pH计、温度计和显微镜。
还使用微生物分析仪，将待测样品、培养基和用于确定灵敏度的测试套件放入其中。该设备会进行必要的研究并得出现成的结论。